目的：
　　碳青霉烯类抗菌药物是治疗细菌感染的最后一道防线，然而随着临床使用增加，近年来耐药菌株不断出现，发现我院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)五年内检出率由0.46%攀升至5.27%，耐药情况不容乐观，应当引起我们足够的重视。本课题对我院CRKP耐药现状及流行机制进行调查，明确其耐药基因型，并分析ST型，进一步选取中药单体黄连素作用于产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)的菌株，观察耐药逆转作用，为中药防治耐药菌提供实验室依据。
　　方法：
　　我们拟回顾性分析2015-2017年河南中医药大学第二附属医院肠杆菌科细菌检出量，计算CRKP检出率，剔除同一病人重复菌株，复苏所选菌种，采用VITEC2-Compact全自动微生物分析仪重新进行菌种的鉴定及药敏结果的复核，用WHONET5.6软件分析其对常用抗菌药物耐药情况。并采用EDTA-亚胺培南双纸片协同法初步筛选金属酶表型，PCR和琼脂糖电泳检测其携带的耐药基因型，多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)测定菌株间存在的亲缘关系。然后选取大肠杆菌EC600(对美罗培南敏感，利福平耐药)为受体菌，确定产KPC的CRKP作为供体菌，进行接合转移实验来探究耐药基因是否具有传播性，配制含2μg/mlMEM、100μg/ml利福平中国蓝筛选平板筛选接合子，统计其接合效率，同时将接合子连续进行传代培养，5天后，采用纸片法复核其对MEM的耐药情况，以探究接合质粒的稳定性。最后运用中药单体黄连素作用于CRKP，采用微量肉汤倍比稀释法测得黄连素对CRKP的MIC，选取亚MIC浓度的黄连素和CRKP共培养，用1%SDS(十二烷基硫酸钠)作为阳性对照，培养24h、48h、72h后，用影印平板法将菌落分别影印至含2μg/mlMEM的中国蓝筛选平板和哥伦比亚血平板，对比确定消除率，探讨黄连素对CRKP耐药性逆转作用。
　　结果：
　　2015年1月至2017年8月共检出10222例细菌感染标本，其中肺炎克雷伯菌1166例，占11.4%，非重复分离82例CRKP，82株CRKP菌株表现出较高耐药率，对绝大部分抗菌药物耐药或中介，仅对临床运用较少的米诺环素、替加环素和磷霉素相对敏感。82株CRKP中有23株产ESBLs，比率为28.04%(23/82)，EDTA-亚胺培南双纸片协同法测得82株CRKP中产酶的有20株，耐药基因检测结果显示：有64株KPC阳性。MLST结果显示：ST11型最多，有21株。从中选取19株产KPC的CRKP菌株进行质粒接合转移试验，有6株接合成功，占31.58%(6/19)，在连续转种5天后仍对碳青霉烯类抗菌药物耐药。黄连素对试验菌株在24h、48h和72h的R质粒消除率分别为：0、3.1%和4.7%；十二烷基磺酸钠(SDS)对试验菌株在24h、48h和72h的R质粒消除率分别为：1.1%、4%和8.1%；空白对照组所有时间段质粒消除率均为零，从而排除质粒在复制中自行丢失的可能性。
　　结论：
　　CRKP检出率逐年上升，是一个严重问题，要引起足够重视，我院分离的CRKP最主要耐药机制为产碳青霉烯酶，高水平耐药可合并其他如产ESBLs机制，不同科室分离出的CRKP多位点序列分型显示主要为ST11型，占63.6%，提示耐药菌在院内有一定的传播性。我院主要耐药基因型为KPC，部分KPC可通过质粒传播，虽然传播几率不高，但值得注意的是传播的耐药质粒具有遗传稳定性，中药黄连素对CRKP的MIC低，有很好的抗菌效果，并且亚MIC浓度的黄连素对CRKP的耐药性有一定的逆转作用，实验研究发现逆转率没有SDS效果好，但SDS为化学试剂，不能用于临床。