【摘 要】
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青钱柳多糖是一种从青钱柳叶中提取出来的天然活性物质,具有多种活性功能。本文的目的是为了明确其结构特点,探究其抗氧化活性与抗炎的活性的作用机理,文中的试验材料是经过水提醇沉、除蛋白和DEAE-纤维素柱分离纯化后,用0.05 M的Na Cl溶液洗脱的青钱柳多糖组分,对该组分的理化性质和结构特点进行了分析,并以脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW 264.7细胞为体外细胞模型
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青钱柳多糖是一种从青钱柳叶中提取出来的天然活性物质,具有多种活性功能。本文的目的是为了明确其结构特点,探究其抗氧化活性与抗炎的活性的作用机理,文中的试验材料是经过水提醇沉、除蛋白和DEAE-纤维素柱分离纯化后,用0.05 M的Na Cl溶液洗脱的青钱柳多糖组分,对该组分的理化性质和结构特点进行了分析,并以脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW 264.7细胞为体外细胞模型,研究了青钱柳多糖作用于细胞的抗氧化和抗炎活性,以及可能的作用机理,主要试验结果如下:1.青钱柳多糖在经过DEAE-纤维柱分离纯化后,蛋白质含量降低,总糖的含量上升,纯化前的青钱柳多糖(CPP)由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为0.021:0.237:0.020:0.036:0.454:0.231;经DEAE-纤维柱纯化后得到的CPP-D由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为0.235:0.677:0.088。青钱柳多糖的分子量在经DEAE-纤维柱分离后变小,CPP的平均Mw为1.5×105 Da,CPP-D平均Mw为9.1×103 Da。通过NMR的分析得到了青钱柳多糖的骨架结构为:→(4)-β-D-Glc-(1)7→(2)-β-D-Man-(1)2→4)-β-D-Gal。2.青钱柳多糖在6.25-200μg/m L的浓度范围内对RAW 264.7细胞无毒害作用,并促进其增殖。青钱柳多糖能够降低RAW 264.7细胞中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的量,并提高超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Hydrogen peroxidase,CAT)的活性,增强总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)。能够降低RAW 264.7细胞氧化应激时产生活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的水平,对RAW 264.7细胞中与抗氧化有关的SOD1和CAT的m RNA具有调节作用。能够激活RAW 264.7细胞中与抗氧化有关的信号通路核因子E2相关因子/血红素加氧酶(Nuclear factor E2-related factor 2/Heme oxygenase,Nrf2/HO-1),对相关蛋白的表达水平具有调节作用。3.青钱柳多糖能够降低LPS刺激的RAW 264.7细胞分泌肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、一氧化氮(Nitric Oxide,NO)的水平,提高白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)的水平,能够降低RAW 264.7细胞中炎症相关的TNF-α、IL-1β和IL-6的m RNA表达水平,抑制RAW 264.7细胞中与抗炎有关的信号通路核因子-κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB),对相关蛋白的表达水平具有调节作用。
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