【摘 要】
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侧流免疫层析(LFIA)是一种基于抗原抗体特异性免疫反应和纳米探针标记技术的快速检测平台,能实现复杂基质中目标分析物的定性或定量检测。LFIA中最常见的标记材料是胶体金纳米颗粒(Au NP),但基于Au NP的检测试纸通常仅提供定性或半定量结果,并且存在颜色强度低、灵敏度差、有假阳性或假阴性以及背景干扰等缺点,另外,蛋白与Au NP的偶联主要是通过静电吸附作用,这种非共价连接方式不利于探针的稳定性
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侧流免疫层析(LFIA)是一种基于抗原抗体特异性免疫反应和纳米探针标记技术的快速检测平台,能实现复杂基质中目标分析物的定性或定量检测。LFIA中最常见的标记材料是胶体金纳米颗粒(Au NP),但基于Au NP的检测试纸通常仅提供定性或半定量结果,并且存在颜色强度低、灵敏度差、有假阳性或假阴性以及背景干扰等缺点,另外,蛋白与Au NP的偶联主要是通过静电吸附作用,这种非共价连接方式不利于探针的稳定性和重复性。这些缺点阻碍LFIA在即时检测(POCT)领域的进一步应用。虽然一些新颖的设计方法已被纳入商业LFIA试纸条中以提高其分析性能,但可能增加LFIA试纸条的整体费用,另外还需要借助昂贵的分析仪器进行定量分析。因此,开发新的标记材料对于提升LFIA检测性能尤其定量分析性能至关重要。本文采用了聚左旋多巴纳米颗粒(PLD NP)作为LFIA试纸条的标记材料。PLD NP表面具有丰富的羧基,易与蛋白形成更加稳定结合的共价连接。此外黑色PLD NP的粒径比Au NP更大、且与白色背景的反差大,因此基于PLD NP制备的LFIA试纸条,可能具有更高的检测灵敏度和更快的检测范围。炎症生物标志物降钙素原(PCT)与C反应蛋白(CRP)的快速、灵敏和定量检测对于临床应用至关重要。本文利用PLD NP作为标记材料制备了PCT和CRP两种免疫层析检测试纸条,结合比色定量法,实现PCT和CRP浓度的定量检测。(1)本文成功制备了基于PLD NP的PCT免疫层析定量检测纸条:通过对抗体型号、PLD NP粒径、偶联缓冲液p H、抗体与微球的比例、喷射量、T线浓度进行优化提升试纸的检测性能。最终所建立的基于PLD NP的PCT免疫层析检测试纸条的定量范围为0.1~100 ng/m L,标准曲线相关性大于0.99,无交叉反应,并成功应用于PCT临床血清样本的检测。(2)本文成功制备了基于PLD NP的CRP免疫层析检测试纸条:以双抗体夹心法检测CRP出现的钩状效应(hook effect)以及标准曲线的相关性等因素为分析条件对抗体型号、PLD NP粒径、偶联缓冲液p H、抗体与微球的比例、喷射量、T线浓度进行工艺优化。最终所建立的基于PLD NP的CRP免疫层析检测试纸条的定量范围为0.5~100μg/m L,标准曲线相关性大于0.99,特异性良好应,在一定范围内对CRP临床血清样本浓度的检测一致性较好。
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