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研究背景：膀胱尿路上皮癌(Urothelial Carinoma UC)(以下简称膀胱癌)是泌尿系最常见的肿瘤,占膀胱恶性肿瘤的90%以上,具有多中心、易复发的特点,截至目前尚未找到可靠的指标能够预测膀胱癌的发病风险。人类基因表达的改变是由表观遗传学和遗传学共同作用的结果,且组蛋白的异常甲基化与肿瘤的发生,侵袭力和预后密切相关,这一现象在多发性骨髓瘤,神经母细胞瘤,肝癌,肺癌,前列腺癌,乳腺癌等诸多癌症中得到证实。表观遗传的改变往往发生在肿瘤的早期,具有可逆性,能够为肿瘤的诊断和治疗提供帮助。为此我们研究了组蛋白甲基转移酶-多发性骨髓瘤SET域蛋白(1nultipole myeloma SET domain protein, MMSET)在膀胱癌中的表达情况,以期能够为膀胱癌的早期诊断、预测进展、判断预后、开发新的抗癌药物提供帮助。目的：探讨MMSET在膀胱癌中的表达与其侵袭力和预后的关系,为临床诊断、判断预后和治疗提供帮助。对象方法：1.标本来源：①收集河南省人民医院泌尿外科自2012年3月至2012年5月手术切除的膀胱癌标本30例,正常膀胱组织标本10例,标本离体后迅速清洗并放入-80℃冰箱保存(30min内完成),用于RT-PCR和Western blot试验。②另收集河南省人民医院泌尿外科2007年1月-2009年1月手术切除的存档标本,经病理科医生证实为膀胱尿路上皮癌,数量为70例,且在泌尿外科均有详细的随访记录,随访时间3-60个月,平均随访时间52个月。病理分级按照WHO2004年分级法分为两个组：低分级组(G1级或G2级)58例,高分级组G3级12例。临床分期按照2009年UICC第7版TNM分期分为两个组：非浸润组(Ta-T1期)29例,浸润型组(T2-T4)组41例,另取15例正常膀胱组织标本作为对照。所有标本均经4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋并连续超薄切片(6μm),用于免疫组化。2.采用RT-PCR检测MMSETmRNA在膀胱癌组织和正常膀胱组织的表达情况,分析MMSETmRNA与膀胱癌患者的病理分级、临床分期及预后的关系。3.采用Western blot检测MMSET蛋白在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的表达情况,分析MMSET蛋白的表达与膀胱癌患者侵袭力的关系。4.采用免疫组化定性检测MMSET蛋白在70例膀胱癌组织和15例正常膀胱粘膜组织中的表达情况。以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性,其表达结果评分以细胞染色的比率和强度进行判断。5.对70例患者进行随访分析,将膀胱癌患者MMSET表达情况与患者术后生存时间作Kaplan-Meier曲线,结合监测肿瘤转移、复发时间及生存总时间,分析其预后情况。结果：1. RT-PCR结果：在10例正常膀胱粘膜组织中未见明显MMSET mRNA条带,但在30例膀胱癌组织中,可见强弱不等的mRNA条带,产物大小345bp,与设计的产物相符：其中低级别(G1-G2)和高级别(G3)膀胱癌,非浸润性(Ta-T1)和浸润性(T2-T4)膀胱癌MMSET mRNA之间均有显著差别(P=0.002；P=0.019)。MMSET mRNA与膀胱癌的单发与多发,初发与复发,年龄,性别等无关。2. Western blot结果：阳性表达的MMSET蛋白在152KD处可见灰黑色条带,与MMSET typell蛋白分子量一致。在10例正常膀胱组织中,152KD处未见阳性条带；非浸润性膀胱癌可见较弱条带,浸润性膀胱癌152KD处条带灰度明显增强；低级别膀胱癌152KD处条带弱,但高级别膀胱癌中条带明显增强。采用t检验分别进行分组间的比较,正常膀胱组织和膀胱癌组织,非浸润性与浸润性膀胱癌组织之间,低级别与高级别膀胱癌组织之间等均有显著差异,有统计学意义(P<0.05)。Western-blot检测MMSET蛋白与膀胱癌的单发与多发,初发与复发,年龄,性别等无关(P>0.05)。3.免疫组化结果：15例正常膀胱粘膜组织中均未见棕黄色着色颗粒,MMSET蛋白表达为阴性,膀胱癌组织细胞核中可见黄色-棕褐色颗粒,阳性率为57.1%(n=70),χ2分析具有统计学意义(χ=16.19,P<0.001)；MMSET蛋白表达在G1期膀胱癌阳性率为37.9%(11/27),G2期为61.3%(19/31),G3期为83.3%(10/12),采用两独立样本非参检验(P=0.012)；MMSET蛋白表达在非浸润性膀胱癌(Ta-T1)阳性率为40.7%(11/29),浸润性膀胱癌(T2-T4)中阳性率为70.7%(29/41),χ2分析具有统计学意义(χ2=7.46,P=0.008)。MMSET蛋白的表达在单多发,初复发等中没有显著差异(p>0.05)。4. Kaplan-Meier曲线分析：结果显示MMSET蛋白表达阳性的患者,其术后生存率明显低于阴性患者,且随着表达强度的增高,其生存率的降低也有明显的差异,经Log-Rank检验,差异有统计学意义(P=0.001),χ2值为10.43。结论：MMSET在膀胱癌中高表达并与肿瘤的侵袭力和不良预后相关,可能成为预测膀胱癌的预后指标和潜在的治疗靶点。