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1997年以来，在我国南方番鸭养殖地区爆发一种新发疫病——禽（番鸭）呼肠孤病毒感染，俗称番鸭“肝白点病”或“花肝病”，发病率20％～90％，死亡率10％～30％，应激或混合感染时高达90％以上。由于该病潜伏期短（3～11天），易感日龄小（1～10日龄），雏番鸭免疫系统发育未成熟，难以产生足够的抗体抵挡病毒的攻击，所以获得足够的母源抗体是防控该病的重要手段。本研究以此为出发点，试制了禽（番鸭）呼肠孤病毒感染油乳剂灭活苗，用于免疫接种种番鸭以产生母源抗体保护雏番鸭抵抗病毒的感染，为制定免疫程序防控该病提供重要的依据。 制备疫苗的种毒来源于本实验室分离保存的禽（番鸭）呼肠孤病毒YB分离株，该病毒株具有良好的抗原性和免疫原性。用番鸭胚成纤维细胞传代培养，获得病变集中、一致、病毒含量较高(TCID50为10-7.1934／0.1ml)的细胞毒，即为疫苗抗原液。疫苗抗原液经0.3％甲醛溶液灭活后，用油乳佐剂乳化制成疫苗。 建立间接ELISA方法以检测禽（番鸭）呼肠孤病毒抗体滴度。经二次差速离心、盐析法浓缩提纯细胞毒，获得浓度为0.7355mg／ml病毒抗原液。制备了阳性血清（琼扩效价为1：16）、阴性血清、二抗（兔抗番鸭）阳性血清（琼扩效价为1：128），提纯二抗并标记HRP酶，获得合格的酶标二抗。建立了间接ELISA检测方法：抗原稀释30倍，酶标二抗稀释50倍，血清稀释50倍，临界值为0.5。结果判定：以能产生阳性反应的血清最高稀释度为该血清的终点抗体滴度。 制备的疫苗为油包水型乳白色油状物，稳定性较好。经检验安全，番鸭无不良反应。疫苗放置4℃冰箱保存3个月，免疫效力不变。用试制的疫苗于产前10天免疫种番鸭，皮下注射，1ml／只。免疫后14天，阳转率达100％，抗体水平持续上升，至免疫后60天，抗体滴度约保持在1：700，此后抗体水平开始下降。取种番鸭免疫20天后产下的种蛋，孵出雏番鸭。3日龄雏番鸭母源抗体水平平均达到1：200，7日龄时下降至1：70，14日龄时检测不到母源抗体。 当免疫种番鸭抗体效价达到高峰（抗体滴度1：900）后，取其后代雏番鸭作为免疫组番鸭进行保护力实验，未免疫种番鸭的后代雏番鸭则作为空白组。在进行雏番鸭保护力实验前，预先攻毒一批雏番鸭，待其发病后，把感染发病的番鸭与免疫组、空白组番鸭同群饲喂，检测母源抗体对雏番鸭的保护效果。结果表明：当饲养同居群中感染发病鸭数量达到13％时，有母源抗体的雏番鸭存活率为60％。当饲养同居群中感染发病鸭数量超过40％时，母源抗体无法保护雏番鸭不发病。当攻毒剂量≤5×104.1934TCID50／羽时，则有70％以上的保护。而无母源抗体的雏番鸭在受到≥103.1934TCID50／羽毒量攻击或者饲养同居群中感染发病鸭数量大于13％时，死亡率达到50％以上。 选取不同地区的2个种番鸭养殖场进行田间试验，全场免疫试制的禽（番鸭）呼肠孤病毒感染油乳剂灭活苗，随机采集种番鸭血清，测定抗体滴度，结果均达到实验预期水平，跟踪其后代雏番鸭的生长，饲养良好，未发生禽（番鸭）呼肠孤病毒感染。