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肺癌是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一,尽管近年来肺癌的治疗已经取得了较大的进步,但是由于复杂的因素在肿瘤的侵袭和转移中起着重要的作用,患者长期生存率仍不高。因此,阐明恶性肿瘤侵袭转移的作用机制是防治肿瘤的重要任务。经典Wnt信号通路在早期胚胎发育、成体组织稳态维持、干细胞干性调控和肿瘤发生等过程中均发挥重要作用。Wnt通路的主要核心是转录因子β-catenin,当经典Wnt通路信号激活时,CK1δ/ε活化,活化的CK1δ/ε磷酸化Dishevelled(Dvls),最终导致胞浆内β-catenin不能被泛素化降解而在胞浆中蓄积,入核后的β-catenin与Tcf-4结合并激活Wnt通路的靶基因c-myc、CyclinD1、MMP7等转录活性,促进肿瘤的增殖、侵袭及转移。Coiled-coil domain containing(CCDC)相关结构域家族有多个成员,现有研究报道p53可诱导CCDC85B表达,并且CCDC85B可以通过与β-catenin竞争性结合TCF4转录因子,下调经典Wnt信号通路活性。CCDC85B在肺癌中的表达情况以及其对肺癌细胞增殖、侵袭能力的影响未见报道,这引起了我们的极大研究兴趣。目的:本研究旨在探讨CCDC85B在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及与临床病理因素之间的关系;探讨CCDC85B对肺癌细胞增殖、侵袭能力的影响及其作用机制。研究方法:应用免疫组织化学方法检测NSCLC组织中的CCDC85B的表达情况并分析其表达与临床病理因素之间的关系。在A549及H1299细胞系中双向调控CCDC85B蛋白表达,通过Western blot、集落形成、MTT、Transwell等方法,探讨CCDC85B对NSCLC增殖、侵袭能力的影响及其作用机制。结果:1.NSCLC组织中,CCDC85B呈细胞浆内高表达,并且显著高于癌旁正常肺组织。CCDC85B高表达与TNM分期和淋巴结转移呈正相关。Western blot结果显示:肺癌组织中CCDC85B蛋白表达明显高于癌旁肺组织。细胞系结果表明:CCDC85B在肺癌细胞系中的表达显著高于正常支气管上皮细胞系(HBE)。2.A549和H1299细胞系中,过表达CCDC85B能够促进细胞的增殖和侵袭能力。而干扰CCDC85B蛋白表达能够抑制细胞增殖与侵袭。3.CCDC85B上调Wnt信号通路活性。在A549和H1299细胞系中过表达CCDC85B,发现Wnt信号通路关键蛋白activeb-catenin表达上调、磷酸化b-catenin表达下调,下游靶基因c-Myc、cyclinD1、MMP-7表达上调。干扰CCDC85B蛋白表达发现Wnt信号通路关键蛋白activ-b-catenin表达下调、磷酸化b-catenin表达上调,下游靶基因c-Myc、cyclinD1、MMP-7表达下调。4.CCDC85B通过PI3K/AKT/GSK3b途径上调Wnt信号通路活性。在A549和H1299细胞系中过表达CCDC85B,发现磷酸化AKT(473)、磷酸化GSK3b表达上调;干扰CCDC85B蛋白表达后,发现磷酸化AKT(473)、磷酸化GSK3b表达下调。在过表达CCDC85B后使用AKT通路抑制剂LY294002,发现磷酸化b-catenin表达上调,active-b-catenin、磷酸化GSK3β随之表达下调。结论:1.CCDC85B在NSCLC细胞浆中表达,其高表达与NSCLC患者TNM分期和淋巴结转移相关。2.过表达CCDC85B能够促进肺癌细胞的增殖和侵袭。3.CCDC85B通过PI3K/AKT/GSK3b途径上调Wnt信号通路活性,促进肺癌细胞的增殖、侵袭。