【摘 要】
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哺乳动物卵母细胞减数分裂成熟及植入前胚胎发育是一个复杂的动态生物学过程,受转录因子的调控。这些转录调控因子对卵子及植入前胚胎的发育潜能至关重要。研究发现,线粒体凋亡诱导因子2（AIFM2）在线粒体功能调节、细胞凋亡、脂质过氧化中发挥重要的作用。然而,AIFM2在小鼠卵母细胞成熟及植入前胚胎发育中的作用仍然未知。本研究进行的主要工作和结果如下:（1）AIFM2在小鼠卵母细胞成熟过程中的作用通过免疫荧
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哺乳动物卵母细胞减数分裂成熟及植入前胚胎发育是一个复杂的动态生物学过程,受转录因子的调控。这些转录调控因子对卵子及植入前胚胎的发育潜能至关重要。研究发现,线粒体凋亡诱导因子2（AIFM2）在线粒体功能调节、细胞凋亡、脂质过氧化中发挥重要的作用。然而,AIFM2在小鼠卵母细胞成熟及植入前胚胎发育中的作用仍然未知。本研究进行的主要工作和结果如下:（1）AIFM2在小鼠卵母细胞成熟过程中的作用通过免疫荧光和Western blotting检测实验结果分析,AIFM2在GV期及MII期卵母细胞中均有表达。通过使用AIFM2高选择性抑制剂i FSP1抑制AIFM2活性,分析AIFM2的活性受到抑制以后对于小鼠卵母细胞成熟的影响。研究结果显示,抑制AIFM2活性显著降低了小鼠卵母细胞GVBD发生（p＜0.05）及第一极体排出率（p＜0.05）。本研究对小鼠卵母细胞氧化应激相关指标进行了检测,结果表明AIFM2的活性抑制后小鼠卵母细胞细胞内ROS水平显著升高（p＜0.01）的同时SOD水平显著降低（p＜0.01）。进一步研究发现,卵母细胞的线粒体膜电位水平（p＜0.05）及ATP含量显著降低（p＜0.01）,产生线粒体功能障碍。（2）AIFM2在小鼠植入前胚胎发育过程中的作用免疫荧光和Western blotting研究结果显示,在小鼠植入前胚胎发育过程中,AIFM2的相对表达含量随着细胞增加呈现递增的表达模式。抑制AIFM2活性后,显著降低了小鼠植入前胚胎发育至囊胚阶段的比率（p＜0.01）。并且,抑制AIFM2活性后会导致囊胚直径（p＜0.01）、囊胚细胞数（p＜0.05）、囊胚内细胞比率（p＜0.01）显著降低。进一步研究发现,AIFM2的活性抑制后小鼠植入前胚胎2细胞期细胞内ROS水平显著升高（p＜0.01）,SOD水平显著降低（p＜0.05）,线粒体膜电位水平（p＜0.01）及ATP含量显著降低（p＜0.05）。TUNEL结果显示,AIFM2活性抑制后小鼠植入前胚胎囊胚期的细胞凋亡比率显著增加（p＜0.01）。RT-PCR结果显示,AIFM2的活性受到抑制后Nanog、Pou5f1 m RNA水平在小鼠植入前胚胎囊胚期显著降低,Caspase-3 m RNA水平在小鼠植入前胚胎囊胚期显著升高。综上所述,本论文研究了AIFM2在小鼠卵母细胞成熟及植入前胚胎发育过程中的作用,证明了抑制AIFM2活性可引起小鼠卵母细胞及植入前胚胎发生氧化应激及线粒体功能损伤,进而抑制其发育潜能。研究结果可为揭示小鼠卵母细胞成熟及植入前胚胎发育过程中的重要事件和调控机制提供理论依据。
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