目的：河北省中南部食管癌的发病率居世界之首，食管癌对放疗和化疗均不敏感，因此目前的治疗措施以手术为主。因此，通过各种基础研究，探索食管癌的病因和发病机制，有助于食管癌的早发现、早诊断、早治疗，同时在评估食管癌患者的预后方面，都有着积极的意义。MT是细胞放化疗"解毒"的主要防线，在食管癌中明显高表达，且不同的金属硫蛋白（Metallothineins, MTs）亚型呈现不同的高表达规律。种种迹象表明，这一高表达很可能与基因突变有关，本研究选取食管癌患者，手术获得其肿瘤及正常组织对照，提取DNA，对MT-2A的基因的三个外显子区进行聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction, PCR）扩增，获得相关目的基因的相关基因序列。通过直接测序法得到扩增基因序列，而后将所得结果进行分析，并同人类基因组计划基因比对，寻找有无目的基因突变点存在，以研究MT蛋白编码区是否存在能够导致编码蛋白改变的基因突变。方法：1新鲜食管癌组织和正常食管粘膜组织的获得。收集2010年5月-2011年12月在河北医科大学第四医院胸外科手术的36例食管癌患者的食管癌标本和癌旁正常组织。其中男性24例，女性12例，年龄范围在37-71岁，平均年龄63岁。手术获得新鲜食管癌组织，选取距癌缘5cm以上的食管“正常”粘膜组织作为正常对照。采集组织过程在低温环境下进行，采集后标号并投入液氮保存备用。待术后病理证实为食管鳞状细胞癌的标本入组研究。2将所采集组织切割大小约0.5×0.5×0.5mm的组织制作蜡块。将蜡块切片后行HE染色，确定采集标本为所取组织。3组织DNA提取。切割部分标本行HE染色后，剩余标本采用饱和NaCl法提取组织DNA。将所提取DNA用去离子水溶解，应用分光光度计获得其浓度及纯度-20℃保存备用。4引物设计。应用NCBI查询获得MT-2A外显子区域DNA序列，委托上海生工代为设计引物，经Blast确定引物特异性符合实验要求后合成引物。5目的基因的扩增。根据引物合成报告单推荐退火温度上下浮动2-3℃进行预实验摸索最佳退火温度。根据预实验所得条件进行目的基因的PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳确认扩增效果并判断基因突变可能。6目的基因的直接测序和结果分析。PCR扩增后得到目的基因经琼脂糖凝胶电泳确认后送生工生物工程（上海）有限公司，委托其对扩增产物进行正反链同时测序，在两个序列完全吻合情况下，能够确保100%可靠。最终得到扩增片段的具体序列。而后将所得结果进行分析，并同人类基因组计划基因比对，寻找有无目的基因突变点存在。结果：1所有临床采集标本经HE染色确认，食管癌组织均为食管鳞癌组织，“正常”食管粘膜组织均不含食管癌组织成分。2肿瘤组织与正常组织DNA经PCR后，所得产物电泳后均可出现目的条带，条带单一清晰，位置一致，说明各组织DNA中的引物设计区域无突变存在，上下游引物区间未有插入或缺失基因片段。3经基因测序检测，全部食管癌组织和正常组织标本中均未发现MT-2A的DNA外显子区域存在碱基点突变表现。4发现MT-2A外显子1上游存在一个A/G多态位点，在所有36例患者中，31例不存在该多态位点，5例存在该多态位点，且在癌组织和正常组织中均存在该多态位点。比对人类基因组计划基因库后，证实该多态位点存在。同NCBI数据对比，应用卡方检验分析证实两者无差别（P=0.098）。结论：食管癌患者的食管癌组织中MT-2A的DNA序列呈现出高度保守的现象，即在食管癌组织中未发现能够导致MT-2A编码蛋白改变的DNA突变存在。由此我们认为造成食管癌组织中MT-2A蛋白的蓄积的原因可能是其降解下调造成的，其具体原因有待进一步实验解释。而外显子1的上游区域突变位点对于MT-2A基因的转录、MT-2A蛋白质表达是否有影响，以及其与患者预后之间有无关联仍需进行深入研究。