类胡萝卜素产生菌的筛选及培养条件初步研究

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从四川泸州老窖酒厂的酒糟样品中筛选出7株产黄色、橙色或橙黄色的细菌L-3-H-20、L-6-H-10、L-6-JX-3、L-3-JX-1、L-4-JX-4、L5-H-10、L-6-JX-1。经过多次传代培养后,复筛出一株生物量大,产色素能力强且稳定性好的菌株L-3-H-20,将其重新命名为TH。 对菌株TH进行扫描电镜以及芽孢染色和革兰氏染色观察,发现该菌细胞呈微小的球状,直径在0.5~1.0μm之间,根据伯杰氏细菌鉴定手册(第八版)的分类方法将其初步归属为微球菌属(Micrococcus sp.),再根据手册中的关于微球菌属的生理生化特征描述进行特征实验验证。实验证明该菌株的形态及生理生化特征符合伯杰氏细菌鉴定手船(第八版)中关于微球菌的描述。因此将菌株TH鉴定为微球菌(Micrococcus SP.)。 由于该菌TH是产胞内色素,因此要提取色素就必须先对细胞进行破碎。实验中比较了酸一热破碎法、酶解法、超声破碎法以及振荡破碎法四种细胞破碎方法对该菌株TH的细胞破碎情况,找到了该菌株TH的最佳细胞破碎方法——酸-热破碎法。用该法破碎细胞后经丙酮浸提,细胞残片基本无色,且浸提液中的色素含量明显优于其他三种破碎方法所得的浸提液的色素含量。 实验中对TH所产色素进行了分离和初步鉴定。通过可见紫外光谱实验发现该色素有三个吸收峰,分别在415nm,438nm和470nm处,而438nm是其最大吸收峰。查阅《食用色素的识别与应用》手册以及对比B-胡萝卜素的标准光谱图可以知道,该吸收光谱为明显的类胡萝卜素吸收光谱。此外,通过将薄层层析实验中得到的该色素的迁移值与《食用色素的识别与应用》手册中类胡萝卜素的迁移值进行比对,把此种色素初步确定为绿黄质。 发酵条件优化实验表明,摇瓶装液量、温度、光照、碳源、摇瓶培养助剂是影响TH菌体生物量和色素产量的主要因素。而pH、L-Tyr对此菌株发酵结果影响很小。最终通过多项实验得到了培养TH产类胡萝卜素的最佳条件:液体培养基中蛋白胨5g/L,牛肉膏5g/L,NaCl 5G/L,葡萄糖5g/L,Na<,2>CO<,3>3g/L,番茄汁4mL/L,初始pH为7.0,摇瓶装液量为50mL/500mL三角瓶,光照条件下28℃振荡培养120h。此时菌体生物量和类胡萝卜素产量达到最优组合。每mL培养液中,菌体生物量为55.04mg,类胡萝卜素产量为7.12μg,分别比优化前提高了70.8[%]和54.1[%]。
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