视神经是中枢神经的一部分，它是由视网膜神经节细胞（RGC）的胞体发出的轴突和神经胶质细胞组成，成分单一，便于研究，它是研究中枢神经损伤和神经移植的最佳材料。视神经胶质细胞主要包括星形胶质细胞和少突胶质细胞，发育中的星形胶质细胞（胚胎期8天至产后4天，E8～P4期）能促进损伤后视神经的再生。然而临床上视神经损伤的最常见的好发部位为管内段的视神经，因此管内段的视神经星形胶质细胞和少突胶质细胞的结构和功能研究成为中枢神经损伤和移植研究的热点之一，体外培养、分离、纯化P₂期小鼠管内段视神经星形胶质细胞、少突胶质细胞又是这些研究的基础。本课题成功地体外培养、分离、纯化P₂期小鼠管内段视神经星形胶质细胞、少突胶质细胞，观察了生物学特性，为进一步研究视神经的损伤和移植提供可靠材料。目的：管内段视神经是视神经损伤的常见部位，不同部位的视神经其胶质细胞的组成和承担的作用亦不同，正确获取P₂期小鼠管内段视神经，体外培养、分离、纯化P₂期小鼠视神经星形胶质细胞和少突胶质细胞，观察纯化的星形胶质细胞和少突胶质细胞的生物学特性，为进一步研究视神经的损伤和移植提供可靠材料。方法：在手术显微镜下分别经颅开眶和经眼眶外侧开眶两种手术方法获取P₂期小鼠管内段视神经2mm，组织块直接培养P₂期小鼠视神经胶质细胞，利用摇床振荡法分离纯化星形胶质细胞和少突胶质细胞，特异性蛋白（胶质原纤维酸性蛋白-G F A P，髓鞘碱性蛋白-MBP）标记，免疫组 视神经胶质细胞的培养及其特征观察 中文摘要 化方法染色，间接免疫荧光标记，流式细胞仪检测其相关特性。 结果：经眼眶外侧开眶法获取P。期小鼠管内段视神经手术复杂，眶入口、 视神经管的隆突等解剖标志不易辩认，但出血少；经颅开眶法对小鼠来 说相对较容易，视交叉解剖标志易找，费时短，但出血多。视神经星形 胶质细胞体外培养能迅速分裂增殖，少突胶质细胞生长发育缓慢，传代 困难，振荡法能够分离纯化细胞，所获细胞纯度高，星形胶质细胞GF A P染色，阳性率 9 8％，少突胶质细胞 MBP染色阳性，阳性率 9 6％。 结论：经颅开眶是快速获取P。期小鼠管内段视神经的较好方法，组织块 直接培养P。期小鼠视神经胶质细胞，利用摇床振荡法分离纯化星形胶质 细胞和少突胶质细胞，经免疫组化鉴定，所获细胞纯度高，是进一步研 究视神经胶质细胞的结构和功能以及神经损伤后修复的可靠材料。