猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的以水样腹泻、呕吐、脱水为主要症状的一种猪的高度接触性肠道传染病。自2010年冬起,由PEDV变异株引起的PED在我国多个省份爆发,造成了巨大的经济损失,严重阻碍了我国养猪业的健康发展,目前尚无有效防治PEDV的疫苗。PEDV的S蛋白(纤突蛋白)由S1和S2两个结构域构成。其中S1蛋白是PEDV的主要免疫原性蛋白,包含多个抗原表位和中和表位,并富集多个受体结合域,其与病毒抗原性和吸附入侵密切相关,因此可作为研发PEDV基因工程疫苗的靶蛋白。本研究构建了包含PEDV s1基因的重组杆状病毒rB-S1,通过IFA、SDS-PAGE及Western blot试验证实重组杆状病毒rB-S1能在Sf9昆虫细胞中高效表达S1蛋白,并能与PEDV阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性。本研究利用重组S1蛋白制备的亚单位疫苗免疫妊娠75天的母猪,同时设立灭活疫苗和空白对照组。于母猪分娩前采集血清和初乳,检测血清中抗PEDV特异性IgG抗体、乳汁中IgA抗体和血清中和抗体。结果显示亚单位疫苗组所产生IgG、IgA抗体水平均高于灭活苗组及对照组,说明基因工程亚单位疫苗能够较好地刺激母猪产生免疫。仔猪5日龄时利用PEDV强毒株(CT毒株)进行攻毒,亚单位疫苗组仔猪在攻毒后前三日状态良好,三天后有少数仔猪出现腹泻现象,攻毒保护率为75.32%,高于灭活疫苗和空白对照组。攻毒保护试验结果证实PEDV S1亚单位疫苗能对PEDV CT毒株的攻击具有较好的保护作用。为筛选适合PEDV亚单位疫苗的佐剂,本试验将4种不同佐剂配合S1蛋白制备亚单位疫苗,免疫70天龄肉猪,通过血清ELISA、中和试验、流式细胞术等检测筛选出最佳的佐剂。结果显示ISA 660 VG佐剂的疫苗能够诱导机体产生更高水平IgG抗体和中和抗体,并且能更有效地刺激CD8 T淋巴细胞活化,优于ISA 201 VG、IMS1313 VG N和GEL 01等三种佐剂。进一步确定亚单位疫苗的最佳免疫剂量,本试验分别以50μg、100μg、200μg和400μg S1蛋白的免疫剂量免疫70天龄肉猪,通过血清ELISA、中和试验、流式细胞术等检测筛选出最佳的免疫剂量。结果显示400μg S1蛋白能诱导机体产生更高水平的IgG抗体和中和抗体,并且能更有效地刺激CD8 T淋巴细胞活化。因此,确定本研究中的亚单位疫苗的最佳免疫剂量为400μg/头/次,其最佳的佐剂为ISA 660 VG。综上所述,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了的PEDV CT株的S1蛋白,该蛋白制备的PEDV亚单位疫苗具有较好的免疫保护效果,期望能够为PEDV亚单位疫苗的研发提供参考。