目的：利用融合 PCR 技术构建双 H1 启动子 siRNA 表达框架(siRNAexpression cassettes，SECs)，并针对人端粒酶hTERT基因外显子不同片断构建两条双H1启动子SECs，通过对 HepG2细胞端粒酶hTERT基因表达进行RNA干扰来验证双H1启动子SECs的有效性，从而为siRNA的制备及对肿瘤的抑制提供新的途径。 方法：以pSUPER质粒为模板，经PCR扩增得H1启动子序列；根据端粒酶hTERT基因外显子核酸序列(genebank NM_003219)1778-1796和2346-2364两段序列分别设计引物，利用融合PCR方法分三步构建两端为H1启动子中间为端粒酶特定序列可双向转录的SECs。将PCR产物纯化后用磷酸钙共沉淀法转染HepG2细胞，用TRAP—银染法和TRAP—ELISA法定性和定量检测端粒酶活性，验证双H1启动子SECs是否发挥RNA的干扰作用。 结果：2[％]琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物显示：第一步PCR 反应产物单H1启动子正义(反义)SECs片段长度为251bp，第三步PCR反应产物双H1启动子SECs片段长度为483bp。将第一步与第三步PCR反应产物纯化后分别转染HepG2细胞，检测端粒酶活性，单H1启动子正义(反义)SECs均无RNA干扰作用，端粒酶活性检测未见抑制。而针对hTERT(genebankNM_003219)1778—1796和2346—2364的双H1启动子SECs对端粒酶活性的抑制率分别为58.6[％]和66.1[％]。 结论：利用融合PCR技术成功构建针对hTERT的双H1启动子SECs，并对端粒酶的表达产生了有效的RNA干扰作用，该siRNA制备方法快速，成本低，可为快速筛选干扰位点和建立RNAi文库开拓新的思路。