【摘 要】
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背景:血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）的表型转化是血管发育和重塑的关键,在各种心血管疾病的发展中也扮演至关重要的角色。Notch信号通路是调控VSMC表型转换的重要信号途径,RBP-J作为其核心转录因子参与了调控过程,但具体作用目前尚未明确。目的:本研究旨在明确Notch信号通路在FGF-2诱导VSMC表型转化中是否被转录因子RBP-J调控,进一步
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背景:血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）的表型转化是血管发育和重塑的关键,在各种心血管疾病的发展中也扮演至关重要的角色。Notch信号通路是调控VSMC表型转换的重要信号途径,RBP-J作为其核心转录因子参与了调控过程,但具体作用目前尚未明确。目的:本研究旨在明确Notch信号通路在FGF-2诱导VSMC表型转化中是否被转录因子RBP-J调控,进一步观察RBP-J在FGF-2诱导VSMC表型转化、增殖和迁移中的具体作用。方法:培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞用于实验,首先确定FGF-2诱导VSMC的处理浓度以及时间,并观察FGF-2对VSMC表型转化、增殖和迁移的作用。再按照以下分组转染并处理细胞进行实验:si RNA NC组、si RNA NC+FGF-2组、si RNA RBP-J组、si RNA RBP-J+FGF-2组。采用Western Blot法检测RBP-J对FGF-2激活的平滑肌细胞Notch信号通路的作用,并分析RBP-J对VSMC表型转化相关标志物的影响。最后通过Ed U、划痕实验和Transwell实验观察RBP-J在VSMC增殖和迁移中的具体作用。结果:1.Western Blot结果显示:采用FGF-2处理VSMC时,HEY1、HES1的蛋白表达呈浓度以及时间依赖性,以20ng/m L浓度的FGF-2刺激细胞48h后蛋白表达上调最为显著（P＜0.01）。2.通过q RT-PCR技术我们发现20ng/m L FGF-2处理MOVAS 48h后下调了α-SMA和SM22αm RNA表达,增加了OPN m RNA表达（P＜0.01）。3.通过Ed U实验和划痕实验我们观察到与对照组比较,20ng/m L FGF-2处理组细胞迁移距离上升（P＜0.05）,增殖细胞数增多（P＜0.01）。4.Western Blot结果提示:与si RNA NC组比较,si RNA NC+FGF-2处理组细胞HEY1、HES1蛋白表达升高（P＜0.01）;与si RNA NC+FGF-2处理组比较,si RNA RBP-J+FGF-2处理组细胞HEY1、HES1蛋白表达明显下降（P＜0.01）。5.通过Western Blot实验我们发现:与si RNA NC组比较,si RNA NC+FGF-2处理组细胞α-SMA蛋白表达降低,OPN蛋白表达升高（P＜0.01）;与si RNA NC+FGF-2处理组比较,si RNA RBP-J+FGF-2处理组细胞α-SMA蛋白表达明显升高,OPN蛋白表达降低（P＜0.01）。6.Ed U实验、划痕实验和Transwell实验结果表明:与si RNA NC组比较,si RNA NC+FGF-2处理组细胞增殖和迁移能力增强;与si RNA NC+FGF-2处理组比较,si RNA RBP-J+FGF-2处理组细胞增殖和迁移能力减弱。结论:1.FGF-2激活VSMC的Notch信号通路呈剂量和时间依赖性,并且诱导VSMC去分化、增殖和迁移。2.敲低RBP-J抑制FGF-2诱导的主动脉平滑肌细胞去分化、增殖和迁移,RBP-J这一调控作用可能是介导Notch信号通路起效的。
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