黄瓜EMS突变体库的构建及鉴定

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黄瓜(Cucumis sativus L.)属葫芦科甜瓜属,原产于喜马拉雅山南麓的热带雨林地区,是世界十大蔬菜作物之一,也是我国重要的经济类蔬菜作物。尽管黄瓜的地理分布十分广泛,但与同科的甜瓜、南瓜等作物相比,其品种遗传基础趋于单一化,变异率仅为3%8%,极大地限制了育种进程。本试验以华南型黄瓜高代自交系‘6457’为材料,通过甲基磺酸乙酯(Ethyl methane sulfonate,EMS)诱变的方法构建黄瓜突变体库,分析突变群体的表型变异特点,并利用HRM-TILLING技术进行了突变体筛选,丰富了种质资源,为黄瓜功能基因组研究和新品种选育提供了基础材料。主要研究结果如下:1.利用5个浓度梯度(0、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%),5个时间梯度(4h、6h、8h、10h、12h)对黄瓜高代自交系‘6457’吸胀种子进行处理,根据诱变后种子发芽率、成苗率等的数据统计,综合分析得出1.5%EMS溶液处理10h为最佳诱变条件。2.利用上述最佳诱变条件,处理2500粒‘6457’种子,获得1204个M1植株,M1进行单株自交,得到包含221个M2株系的黄瓜突变体库。性状调查发现,在M1群体中出现了叶片皱缩、叶色嵌合、植株多卷须、矮化、黄化、白化、畸形、果实嵌合体等变异性状;在M2群体中筛选到长瓜、短瓜、心形叶、花萼叶片化、矮化植株等典型的突变体。3.对组成221个M2家系的1506个单株的突变体库进行全生育期表型性状的系统观察与统计,经初步鉴定得到176个突变单株,38个变异性状,总的单株变异频率为11.7%;叶、花、果实、植株性状等的变异株数分别为77、32、57、10,对应性状变异频率分别为5.1%、2.0%、3.8%、0.8%。4.对每个M2家系取样8株混合后提取DNA,以黄瓜刺瘤TU基因和果色AP基因的序列信息设计引物,进行PCR扩增,利用HRM-TILLING技术对扩增产物进行突变体筛选。筛选得到20个刺瘤突变株,编号分别为M-12-7,M-14-2,M-14-3,M-21-1,M-21-8,M-22-3,M-30-6,M-34-1,M-37-9,M-54-2,M-57-2,M-89-7,M-90-1,M-98-4,M-105-7,M-105-8,M-106-9,M-135-4,M-137-1,M-181-1;13个果色突变株,编号分别为M-4-2,M-14-3,M-21-1,M-22-7,M-31-1,M-33-8,M-37-4,M-49-2,M-60-6,M-75-5,M-80-2,M-132-6,M-153-3。
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