外科手术治疗、化疗及放疗是当前临床上用于癌症治疗的主要手段,而这三种治疗手段由于缺乏肿瘤特异性以至于容易致使正常的组织细胞也会受到损伤,同时还会导致较高的肿瘤复发率。嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor T cells,CAR-T)疗法的出现是肿瘤学史上一个巨大的创新。即使CAR-T细胞在肿瘤治疗方面扮演着越来越重要的角色,但是用于制备CAR-T细胞的T细胞除了从肿瘤病人外周血获取之外,其他来源仍然是目前亟需解决的一个难题。当前临床上用于制备CAR-T细胞的T细胞主要取自于肿瘤患者的外周血,然而患者外周血中的T细胞大部分处于衰竭状态,而T细胞的衰竭使得其出现在体外及体内扩增能力较差且治疗时无反应的情况。多能干细胞具备无限增殖的潜能,因此可成为产生T细胞的理想来源。但到目前为止,传统多能干细胞来源的T细胞表现出功能不全或相对较低的活性等缺点。本研究参照本实验室前期探究出的通过诱导外源性基因Runx1和Hoxa9在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)内表达的方法从而驱动其向造血谱系定向分化产生有功能的T细胞。首先我们获得了诱导型生血内皮细胞(inducible hematopoietic endothelial cells,iHECs)。接下来,我们在分选出 iHECs 后将其与OP9-DL1细胞通过共培养的方式诱导造血干祖细胞(inducible hematopoietic stem/progenitor cells,iHPCs)成熟。最后,我们将iHPCs移植至亚致死剂量辐照的B-NDG小鼠体内重建T谱系。移植5周后在受体小鼠外周血、淋巴结以及脾脏中均检测到了大量供体来源的诱导型T(inducible T,iT)细胞。随后,我们通过富集受体鼠脾脏中的iT细胞并经过一系列的CAR-T细胞制备工艺,成功地制备出了 CD19-CAR iT细胞。经过短暂地激活扩增后,我们将CD19-CARiT细胞与B淋巴瘤细胞(Ka539)进行体外共孵育。流式结果表明,与CD19-CARiT细胞共孵育后的Ka539比例明显降低,这充分展现了多能干细胞来源的CAR-iT细胞具备很强的体外杀伤肿瘤细胞的潜能。因此,我们的研究将在很大程度上为再生性的CAR-iT细胞用于肿瘤治疗提供了理论指导和转化技术借鉴。