目的：　　来源于猪、牛、马等动物源性生物材料已被广泛用于再生医学领域。如:生物心脏瓣膜、硬脑膜补片、生物敷料、止血防粘连材料等。然而，当动物组织或动物源性生物材料中残留的异种抗原进入人体内时，会引发超急性或慢性的免疫排斥反应。这种免疫排斥反应的主要靶抗原被认为是由存在于动物组织中的Galα1-3Galβ1-4GlcNAc结构（简称α-Gal抗原）引起的。Gal抗原存在于除了人和高等灵长动物以外的大部分哺乳动物体内。因此，检测Gal抗原含量可以评价动物组织或动物源性生物材料的潜在免疫毒性。然而，目前尚无规范的检测Gal抗原的方法。本研究利用特异性抗体M86，建立了检测动物组织或动物源性生物材料中α-Gal抗原含量的酶联免疫抑制法（ELISA抑制法）。　　方法：　　ELISA抑制法以兔血红细胞作为参考品，以人工合成的Galα1，3-Gal-BSA为固相抗原，包被96孔板;同时，利用特异性抗-Gal单抗M86与兔血红细胞和待检动物组织或动物源性生物材料表面的Gal抗原表位反应后，再与固相抗原反应，检测剩余M86抗体，建立细胞或组织上的Gal抗原含量与M86结合抑制关系曲线;通过计算每个反应的50％结合抑制浓度，对比参考品的Gal抗原数来计算出待测物中的Gal抗原数。　　为建立兔血红细胞为参考品的M86 ELISA抑制法，对兔血红细胞的Gal抗原数进行科学定值很重要。既往文献对兔血红细胞Gal抗原数的赋值方法缺乏溯源性和科学性，所以本研究利用人工合成的Gal抗原（Galα1，3-Gal-BSA，已知抗原表位数），根据上述实验原理对每个兔血红细胞的抗原数进行科学定值。根据定值结果可计算出人工合成的Gal抗原在50％结合抑制时所对应的Gal抗原数（为3.35×1012个）;对比这个抗原数最终确定了每个兔血红细胞中Gal抗原数（约为2.73×107个）。　　为验证试验方法的灵敏性和特异性，本研究研制了Gal抗原阳性和阴性参考品，利用上述建立的方法为阳性参考品进行赋值标定，并进行稳定性和均匀性考察。同时证实了阴性参考品不会检测到Gal抗原。本研究完成的Gal抗原阳性和阴性参考品的标定结果将作为标准物质的报批资料之一。在本研究建立的以兔血红细胞为参考品，定量检测Gal抗原的M86 ELISA抑制法中将同时使用Gal抗原阳性和阴性参考品作为对照组，既保证了该方法具有可溯源性，又能够验证每次试验的灵敏性和特异性，以判断试验的有效性（是否可接受）。　　结果：　　利用本研究建立的方法考察了大鼠主要脏器组织中α-Gal抗原表达情况。其结果是，单位质量动物组织（湿重）所含有的α-Gal抗原数分别为:肝脏组织5.46×1013个/mg;心脏组织5.69×1012个/mg;脾脏组织1.14×1014个/mg;肺脏组织，2.12×1014个/mg;肾脏组织8.52×1014个/mg。同时，考察了猪真皮生物材料脱细胞制备工艺前后的Gal残留量，其检测结果为:脱细胞处理前为1.35×1013个/mg，脱细胞处理后Gal含量为5.17×1012个/mg，减少了60％左右。　　结论：　　本研究结果显示，该方法能够定量性地检测动物组织或动物源性生物材料中Gal抗原含量，有望成为评价动物组织或动物源性生物材料Gal抗原残留的一种有效方法。除此之外，该法还可用于动物源性生物材料及其衍生物、异种组织、器官移植物的开发、生产过程中抗原去除的质控。本研究成果为规范化行业标准草案的起草提供了技术支持。