自组装多肽支架RADA16-W9的体外成骨效应研究

来源 :贵州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:changkaiaini
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目的:1.检测多肽RADA16-W9自组装成凝胶效果以及MSCs在材料上的增殖情况和其微观结构2.评估多肽RADA16-W9的体外成骨效应方法:1.SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)原代分离、培养及鉴定。2.将RADA16和RADA16-W9采用原子力显微镜(AFM)观察自组装多肽微观结构并制备成水凝胶状态。3.将SD大鼠MSCs与多肽水凝胶共培养,采用MTT检测MSCs增殖情况。4.MSCs与RADA16-W9多肽水凝胶共培养后评估体外成骨效应。5.所有数据均用“平均数±标准差表示”,采用统计软件Graph Pad Prism 8软件进行统计学分析。结果:1.所提取的MSCs通过干细胞可分化性进行成骨细胞以及成脂肪细胞诱导鉴定后成骨细胞诱导组与成脂肪细胞诱导组分别出现钙结节与油滴,而非诱导组均为出现钙结节与油滴,证明本次实验所提取的细胞为MSCs2.RADA16与RADA16-W9在AFM观察下成纳米纤维结构并在加入盐离子后可自组装形成水凝胶状态。3.MSCs在RADA16与RADA16-W9两种不同材料上的增殖情况,经统计学处理,在培养一天时,各组之间无统计学意义(P>0.0001);在培养3天、5天时RADA16组高于空白组(P<0.0001),RADA16-W9组高于RADA16组(P<0.0001)。4.MSCs与RADA16、RADA16-W9共培养后7天与14天后通过PCR检测早期成骨指标I型胶原酶(COL-I),矮小相关转录因子2(Runx2),在7天时的空白组、RADA16对照组表达量差异无统计学意义(P>0.05),空白组与RADA16-W9实验组表达量差异具有统计学意义(P<0.001),RADA16对照组与RADA16-W9实验组表达量差异具有统计学意义(P<0.05)。成骨晚期表达物骨桥蛋白(OPN),骨钙素(OCN),在14天时的空白组、RADA16对照组表达量差异无统计学意义(P>0.05),空白组与RADA16-W9实验组表达量差异具有统计学意义(P<0.001),RADA16对照组与RADA16-W9实验组表达量差异具有统计学意义(P<0.05)。5.MSCs与RADA16、RADA16-W9共培养后7天与14天后通过免疫荧光(IF)来验证成骨相关目的蛋白表达情况,7天检测COL-I、Runx2表达,14天检测OCN、OPN表达,空白组7天与14均未出现目的蛋白表达,对照组出现少量目的蛋白表达,实验组出现了大量目的蛋白的表白。结论:骨移植材料需要很好的性能,其要求苛刻,自组装多肽作为一种人工可合成其含水量较高且有很好的孔隙度,可以说是细胞的增殖、分化良好的载体,并且自组装多肽是由天然氨基酸合成而来,具有良好的生物相容性,降解后产物能避免免疫原反应。本研究将具有成骨效应的多肽片段GGYCWSQYLCY通过固相合成法加入到RADA16的C端形成具有成骨诱导的自组装多肽RADA16-W9并通过实验证明自组装多肽可形成水凝胶状态且适合细胞体外培养的三维纳米材料,并且在体外与细胞共培养具有促进成骨诱导作用,为骨组织工程骨修复材料奠定基础。
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