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目的揭示DTX3L在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞粘附过程中的作用机制,并探索DTX3L在MM细胞对蛋白酶体抑制剂(Proteasome inhibitor,PI)硼替佐米(Bortezomib,Bort)的耐药过程中发挥的作用。为提高多发性骨髓瘤治疗疗效、改善预后方面提供新的理论依据。方法1.使用无血清培养液养多发性骨髓瘤细胞72h后,换用含血清培养液培养骨髓瘤细胞48h。细胞增殖过程中,蛋白免疫印迹检测DTX3L,增殖相关蛋白PCNA,CDK2及细胞周期蛋白cyclinE的表达。同时,通过流式检测细胞周期的改变。2.在骨髓瘤细胞中干扰DTX3L的表达,Western Blot检测增殖相关蛋白PCNA,CDK2及细胞周期蛋白cyclinE的表达,CCK-8检测细胞活力,流式检测细胞周期的分布。3.将骨髓瘤细胞RPMI 8226和NCI-H929与骨髓基质细胞HS-5或者纤连蛋白(Fibronection,FN)共培养构建粘附模型。Western Blot检测DTX3L在骨髓瘤细胞悬浮及黏附两种状态下的表达情况;在骨髓瘤细胞中干扰DTX3L的表达,钙黄绿素实验检测DTX3L表达降低后对骨髓瘤细胞粘附率的影响。4.在粘附的骨髓瘤细胞中干扰DTX3L的表达,用化疗药物硼替佐米处理后,通过Western Blot检测凋亡相关蛋白caspase3和PARP的表达,并用流式检测细胞的凋亡情况。5.干扰骨髓瘤细胞DTX3L的表达,Western Blot检测ERK,p-AKT,FAK,AKT和p-ERK的表达。结果1.DTX3L,PCNA,CDK2,cyclinE的表达在细胞增殖过程中不断增高;细胞周期G1期分布逐渐降低,S期分布逐渐增加。2.在骨髓瘤细胞中干扰DTX3L的表达后,PCNA,CDK2,cyclinE的表达减少。同时,流式检测细胞周期中G1期增加。并且CCK8检测表明,干扰DTX3L表达后,细胞生长缓慢。3.骨髓瘤细胞粘附培养后,DTX3L表达增高。钙黄绿素实验显示,干扰DTX3L的表达后,骨髓瘤细胞的粘附率降低。4.硼替佐米刺激干扰DTX3L表达后的粘附的骨髓瘤细胞,凋亡相关蛋白caspase3和PARP的表达增加。流式检测细胞的凋亡比例增高。5.骨髓瘤细胞粘附后,FAK和AKT信号通路的表达增高。用硼替佐米刺激后:干扰DTX3L表达后,FAK和AKT信号通路的表达均减少。结论1.DTX3L的高表达与多发性骨髓瘤细胞增殖密切相关。2.干扰DTX3L的表达可以抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖。3.DTX3L的高表达能够促进多发性骨髓瘤细胞的粘附。4.干扰DTX3L的表达可以降低细胞粘附介导的药物抵抗。5.DTX3L在多发性骨髓瘤细胞发生CAM-DR的过程中的表达被FAK信号通路上调,并可以通过上调AKT信号通路来发挥作用。