论文部分内容阅读
目的：应用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)方法，检测分化抑制因子(inhibitors of differentiation，Id)在健康志愿者、急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病白细胞中的表达情况，探讨Id基因表达与急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病发病的相关性，为白血病的诊断、治疗提供参考。
方法：分别收集20例健康自愿者(healthy volunteers，HV)新鲜外周静脉血，16例急性菲淋巴细胞白血病(acute non-lymphocytic leukemia,ANLL)和10例慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)新鲜外周静脉血，采用密度梯凄离心法分离白细脆，分别加入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，3％ Dextron T-500沉淀红细胞，小心混匀后静置30min，磷酸盐缓冲液(Phosphate-buffered saline PBS)充分混匀洗涤2次，采用密度梯度离心法离心，弃上清液加入红细胞裂解液充分裂解红细胞，离心，弃上清液加入PBS洗涤2次，弃上清液收集外周血白细胞。Trizol试剂提取各组样本白细胞总RNA。经紫外分光光度计检测OD260/OD280的比值及各组样本外周血白细胞总RNA的含量，计算出各组的RNA的浓度与纯度。用1.5％的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测健康自愿者、急性非淋巴细胞白血病患者、慢性粒细胞白血病患者外周血自细胞总RNA分子的完整性。
利用逆转录酶和随机引物将总RNA逆转录成cDNA，然后应用Primer 5.0引物设计软件设计的Id基因各亚型(Id1，Id2，Id3，Id4)的特异引物进行体外扩增。以β-action基因作为内参照进行标准化，应用SPSS 14.0统计分析软件，统计并分析各组样本在相同标准化条件下DNA扩增产物是否存在差异。
结果；
①RT-PCR分别扩增健康自愿者、急健非淋巴细胞白血病患者、慢性粒细胞白血病患者中Id1，Id2，Id3，Id4四种目的基因和内参对照β-action基因的cDNA产物，与DNA分子Marker相比较显示扩增产物大小分别为494bp，354bp，170bp，170bp和527bp，与预期理论值大小一致。
②将Id1，Id2，Id3和Id4四种目的基因与内参照β-action基因的比值，分别在健康自愿者、急性非淋巴细胞自血病患者、慢性粒细胞自血病患者组中半定量表达的情况经过单因素方差分析和SPSS 14.0统计分析结果显示，四种Id基因亚型在健康自愿者和急性非游巴细胞白血病患者、慢性粒细胞白血病患者白细胞中的表达各不相同。Id1基因在健康自愿者外周血自细胞中表达较高，但在急性非淋巴细胞白血瘸患者、慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中表达降低(P<0.001，P<0.042)。Id2基因在健康自愿者外周血白细胞中表达较低，但在急性非淋巴细胞白血病患者、慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中表达增高(P<0.01，P<0.039)。Id3基因在健康自愿者外周血自细胞中表达较高，但在急性非淋巴细胞白血病患者和慢性粒细胞白血瘸患者外周血白细胞中表达降低(P<0.002,P<0.046)。Id4基因在健康自愿者外周血白细胞中表达较高，但在急性非淋巴白血病患者和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中表达降低(P<0.011，P<0.025)。
结论：Id基因四种亚型Id1，Id2，Id3和Id4，分别在正常人、急性非淋巴细胞白血病患者和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达存在差异性；Id基因各亚型在外周血白细胞中的表达量与急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病的发病有一定的相关性。