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第一部分:ITP患儿PD-1、PD-L1的表达及T淋巴细胞亚群变化的临床意义目的:探讨T细胞共刺激分子PD-1、PD-L1的表达以及T淋巴细胞亚群变化在儿童免疫性血小板减少症(ITP)中的临床意义。方法:研究纳入2019年9月至2020年1月在我院住院确诊为ITP的患儿共25例,根据是否治疗,分为治疗前组和治疗后组;根据治疗方案不同,分为方案1:免疫球蛋白(IVIG)治疗组,方案2:甲泼尼龙(Met)治疗组,方案3:IVIG+Met联合治疗组;16例健康对照组(对照组)来自于同期门诊健康体检儿童。收集临床资料,采集外周静脉血2 mL,采用流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞亚群(CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞)、T细胞共刺激分子(CD4~+PD1~+T、CD8~+PD1~+T)及单个核细胞PD-L1(Mon~+PDL1)的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中sPD1的表达,进行统计学分析。结果:(1)治疗前组CD4~+T细胞的表达以及CD4/CD8的比值均明显低于健康对照组(P<0.05),而CD8~+T细胞的表达明显高于健康对照组(P<0.05);治疗前组与治疗后组差异无差异(P>0.05);(2)治疗前组CD4~+PD1~+T、CD8~+PD1~+T及Mon~+PD-L1的表达明显高于健康对照组(P<0.05),也明显高于治疗后组(P<0.05);治疗后组与健康对照组比较无差异(P>0.05);(3)三种治疗方案,每种方案治疗前组的表达均明显高于治疗后组(P>0.05);(4)治疗前组、治疗后组sPD1浓度均明显高于健康对照组(P<0.05);治疗前组与治疗后组间差异无统计学意义(P>0.05);(5)CD8~+PD1~+T与CD4~+PD1~+T呈正相关(r=0.454,P<0.05)、与sPD1浓度呈负相关(r=-0.399,P<0.05),与血小板数呈负相关(r=-0.398,P<0.05)。结论:(1)ITP患儿存在T淋巴细胞亚群功能的紊乱,表现为CD4~+T、CD4/CD8比值的减低以及CD8~+T的增高;(2)ITP患儿存在T细胞共刺激分子PD1、PD-L1及sPD1异常表达,免疫功能紊乱可能与PD1、PD-L1的异常表达有关;(3)治疗后T淋巴细胞亚群功能的紊乱及PD1、PD-L1的异常表达可以改善。(4)ITP患儿存在sPD1的高表达,与治疗与否无关。第二部分:ITP患儿MPIG6B、MEF2C及WDR1基因的表达及临床意义目的:探讨肌细胞增强因子2C(MEF2C)、WD重复蛋白1(WDR1)以及巨核细胞和血小抑制受体G6b(MPIG6B)三个基因在儿童ITP中的表达及临床意义。方法:2019年6月至2020年1月在我院住院确诊为ITP的患儿共37例,实验分组:根据病程分为新诊断组(26例)和非新诊断组(11例);根据初诊时是否开始治疗分为治疗前组、治疗后组;根据治疗方案不同分为方案1:免疫球蛋白(IVIG)治疗组,方案2:甲泼尼龙(Met)治疗组,方案3:IVIG+Met联合治疗组;收集临床资料,采集治疗前及治疗后7天外周静脉血2 m L(EDTA抗凝),健康对照组选取同期门诊健康体检儿童17例,分离细胞及血浆,用荧光定量PCR方法(FQ-PCR)检测血细胞中MPIG6B、MEF2C、WDR1三个基因m RNA的表达,Western blot检测蛋白的表达,对结果与临床特征进行比较分析。结果:(1)MEF2C基因m RNA在非新诊断组治疗后的表达(0.42±0.24)均低于正常对照组(1.19±0.86)、新诊断组治疗前(1.97±1.40)、新诊断组治疗后(1.52±0.96),(P分别为0.046,0.019,0.02),差异均有统计学意义(P<0.05),其他各组间MEF2C基因m RNA的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)WDR1基因在各组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。(3)MPIG6B基因m RNA在新诊断ITP组治疗前的表达(2.12±0.88)明显低于本组治疗后(4.56±1.78)(P=0.003)、非新诊断ITP治疗前(4.30±1.58)(P=0.023)以及健康对照组(3.78±2.32)(P=0.035),差异均有统计学意义;新诊断ITP组治疗前的表达(4.56±2.68)明显高于非新诊断ITP组治疗后(2.59±1.31)(P=0.016),差异有统计学意义;非新诊断ITP组治疗前表达(4.30±1.58)明显高于非新诊断ITP组治疗后(2.59±1.31)(P=0.048),差异有统计学意义。用Western blot检测法对该基因进行验证,其结果是一致的。结论:(1)MPIG6B基因在儿童ITP不同的分期表达不同,表现为该基因在新诊断组治疗前低表达,治疗后明显升高;在非新诊断组治疗前高表达,治疗后明显下降,且与治疗有关;(2)MEF2C基因m RNA在非新诊断组治疗后呈低表达,与治疗有关;(3)WDR1基因m RNA在各组间的表达无差异。