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蓝舌病(Bluetongue)是由蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV)引起的以媒介昆虫库蠓为主要传播媒介的一种非接触性传染病,其易感动物为绵羊、山羊、牛和鹿等反刍动物。蓝舌病的暴发经常给家畜养殖业造成巨大经济损失,因此世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须上报的动物传染病。BTV隶属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)环状病毒属(Orbivirus)。microRNA(miRNA)是大小约为19-25个核苷酸具有调控功能的一类非编码单链小RNA。近年来研究表明,miRNA在病原-媒介-宿主相互作用过程中发挥重要的调控作用,可通过调控靶基因的表达影响病毒的感染与复制,在宿主细胞的免疫调控和抗病毒反应中发挥重要作用。目前,人们对BTV与细胞相互作用的理解非常有限,细胞miRNA在BTV感染过程中的作用仍不清楚。本研究首先利用Solexa高通量测序技术对BTV感染的白纹伊蚊(Aedes albopictus,A.albopictus)细胞和原代绵羊睾丸(primary sheep testis,PST)细胞及其未感染样品进行miRNA测序,借助生物信息学技术对差异表达miRNA及其靶基因进行功能注释和分析,通过实时定量PCR方法对部分差异miRNA和靶基因的表达丰度进行了验证。同时选择了三个表达差异的miRNA,对其在BTV复制过程中的作用机制进行了初步研究,结果如下:1.BTV感染A.albopictus细胞组和对照组经高通量测序获得11,206,854和12,125,274个可信序列标签,分别含89和92个已知miRNA,266和181个新预测miRNA。两组之间有15个已知miRNA和125个新miRNA发生显著差异表达。GO和KEGG分析显示靶基因主要参与内吞作用、代谢途径、FoxO、Hippo、Jak-STAT和MAPK等信号通路,表明miRNA在BTV感染媒介细胞过程中发挥广泛的调控作用。2.选取具有差异表达的aae-miR-1889-5p和aae-miR-2940-5p为靶标,将其模拟体、抑制剂及对照转染A.albopictus细胞,并利用qRT-PCR和噬斑试验分析BTV在转染细胞中的增殖效率,结果表明两种miRNA模拟体可分别上调BTV NS3基因表达1.55-2.88倍和2.00-3.22倍,且病毒滴度均增加,而miRNA抑制剂可明显分别下调BTV NS3基因的表达0.54-0.64倍和0.55-0.86倍,且病毒滴度均降低,表明aae-miR-1889-5p和aae-miR-2940-5p均可促进BTV在A.albopictus细胞中复制。3.BTV感染PST细胞组和对照组经高通量测序获得10,908,164和11,920,794个可信序列标签,分别含87和90个已知miRNA,182和155个新预测miRNA。两组之间有2个已知miRNA和70个新miRNA发生显著的差异表达。GO功能和KEGG路径分析显示差异表达miRNA的靶基因主要参与催化活性、病毒感染、内吞作用、代谢途径等信号通路,表明miRNA在BTV感染宿主细胞的多个环节同样具有潜在的调控作用。4.进而选取novel-mir-105为靶标,将其模拟体、抑制剂及对照转染PST细胞,并利用qRT-PCR和噬斑试验分析BTV在转染细胞中的增殖效率,结果表明miRNA模拟体转染组BTV NS3基因下调0.32-0.80倍,且病毒滴度降低,而miRNA抑制剂转染组BTV NS3基因上调2.09-2.41倍,且病毒滴度增加,表明novel-mir-105抑制BTV在PST细胞中复制。