五味子多糖的分离、结构鉴定及抗变态相关活性研究

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五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill的干燥成熟果实,属药食两用的传统中药。研究表明,五味子具有抗肿瘤、保护肝脏、抗氧化和抗衰老等药理活性。其化学成分主要有木脂素、挥发油、三萜类、多糖等,前三者研究较为深入,而对于其中多糖成分研究却很少报道。本论文对五昧子多糖进行分离提纯、结构鉴定及五味子进行药理活性筛选。  1、五味子多糖的分离提纯、结构鉴定:采用脱脂、水提醇沉、脱蛋白和透析等程序得到了粗多糖,通过DEAE-32选用水液、0.1 mol/L NaCl、0.2mol/L NaCl、0.5mol/L NaCl、1.0mol/L NaCl梯度进行洗脱得到SCP-0、SCP-1、SCP-2、SCP-5、SCP-10,再经过sephadex-200将SCP-2、SCP-5进行进一步地纯化,分别得到2个均一化合物即SCP-2-A、SCP-2-B,SCP-5-A、SCP-5-B。通过各种化学方法(糖组成分析、糖醛酸还原、部分酸水解、甲基化分析等)和光谱学方法(13C-NMR、IR、HPGPC、GC-MS等)对上述这4个均一多糖的一级结构进行了解析。结果表明:①SCP-2-A为一种酸性杂多糖,分子量为1.2089×104道尔顿,主要由D-Glc和D-Gal组成,还含有少量的D-Rha和Man。主链是由β-1,4-Manp(101.17 ppm)、α-1,6-Galp(98.96 ppm)、[α-Glc(1,4)]n(99.59 ppm)及1,4,6-Glcp组成,分支点在1,4,6-Glcp上,共有3个分支点,一个侧链是由7个糖组成,其中有5个Glc和1个Gal组成,连接方式主要1,4-连接,并且端基出现一个Gal信号;另一个侧链是由3个Glc和1个Gal组成,连接方式也是1,4-连接,端基是Glc信号;还有一个分支点是由2个1,4-Glc组成。②SCP-2-B为一种酸性多糖,分子量为7.77×103道尔顿,主要由D-Glc和D-Gal组成,还含有少量的D-Rha。主链是由[α-Glc(1,4)-]n、1,4,6-Glc组成,其中里面存在5个侧链,其中里面存在5个侧链,SCP-2-B-1是由7个糖组成,其中含有3个1,4-Galp和3个1,4-Glcp,末端显示的是Glc。SCP-2-B-2由6个糖组成,里面含有1个1,4-Galp和5个Glcp,还存在一个1,4,6-Glcp,即寡糖还有分支。SCP-2-B-3是由5个糖组成,4个1,4-Glcp,末端为Gal。SCP-2-B-4是由5个Glc组成,即存在1,4-连接,也存在1,6-连接。SCP-2-B-5由4个糖组成,其中含有1个1,4-Galp和2个1,4-Glcp,末端是Glc。这些寡糖链连在1,4,6-Glc上。③SCP-5-A为一种酸性杂多糖,分子量为2.8542×104道尔顿,主要由D-Glc和D-Gal组成,还含有少量的D-Rha和Man。主链是由β-1,4,6-Manpα-D-1,4-Glcp、α-1,6-Galp、α-1,6-Glcp、1,3,4-Rhap连接,侧链至少含有3个,SCP-5-A-1由6个糖组成,其中包括1个1,4-Galp和4个1,4-Glcp,末端信号显示的是Glc;SCP-5-A-2是由4个1,4-Glcp组成;SCP-5-A-3也是由4个糖组成,1个1,4-Galp和2个1,4-Glcp组成,末端显示是Gal。另外在主链上还存在糖醛酸以及甲酯。④SCP-5-B为一种酸性多糖,分子量为1.3180×104道尔顿,主要由D-Glc和D-Gal组成,还含有少量的D-Rha和D-Man。主链是由α-D-1,4-Galp、[α-1,4-Glcp]n、β-1,4,6-Manp、α-1,6-Rhap及半乳糖醛酸组成,共分到3个寡糖链,SCP-5-B-1是由8个糖组成,是由2个1,4-Galp和5个1,4-Glcp,末端显示的是Gal;SCP-5-B-2是由4个1,4-Glcp组成;SCP-5-B-3是由2个Rha和2个1,4-Glcp组成,末端显示的是Glc。另外,乙酰基取代应该也是存在于侧链上。  2、五味子多糖抗变态反应活性筛选:对五味子多糖进行了抗变态反应药理活性筛选,通过小鼠耳异种被动皮肤过敏实验、大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒实验及抗补体实验进行筛选发现该多糖具有很好的抗Ⅰ型变态反应活性;通过抗补体实验证明其不具有抗Ⅱ型变态反应活性;至于抗Ⅲ、Ⅳ型变态反应有待进一步考究。同时,抗氧化活性筛选(即DPPH清除作用)证实其具有抗氧化活性,与以往所报道的药理活性相符,即具有抗老化和抗衰老作用。  上述结果为五味子多糖构效关系研究及进一步开发提供了较为可靠的科学依据。
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