Maspin表达沉默对T24细胞上皮间质化及侵袭迁移的影响

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目的:选择膀胱癌T24细胞作为研究对象,使用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi),沉默maspin基因表达,探讨maspin基因表达降低对T24细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)和侵袭迁移的影响。方法:培养人膀胱癌T24细胞,并构建maspin干扰质粒maspin-shRNA,将maspin-shRNA质粒及阴性质粒分别转染入T24细胞,并设计空白对照,转染48h后,分别从mRNA及蛋白水平测定maspin的表达,选择干扰效果最好组进行下一步实验。实验分以下3组,即T24组、T24+maspin-shRNA组、T24+N.C组。转染48h后,在倒置显微镜视野下观察细胞的形态学变化;Western Blot实验,检测三组细胞E-cadherin及Vimentin的表达水平,明确maspin基因表达下调,对T24细胞上皮间质化的影响;采用划痕试验及Transwell小室试验检测maspin基因下调对T24细胞的侵袭能力,迁移能力的影响。结果:筛选出干扰效果最强组为Maspin shRNA-4;maspin-shRNA转染T24细胞,与未转染组比较,转染组细胞之间连接疏松,细胞形态变为梭形,细胞间隙增大,呈现细胞间质化表型。Western-blot检测结果显示,Vimentin表达增加,E-cadherin表达降低(P<0.01);划痕试验及Transwell实验结果表明,maspin基因表达降低,细胞侵袭及迁移能力增强(p<0.05)。结论:沉默maspin基因表达能促进膀胱癌T24细胞发生EMT;沉默maspin基因表达能增强T24细胞的侵袭与迁移能力,其机制可能与maspin表达降低促进T24细胞发生EMT有关。
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