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CRISPR/Cas系统作为第三代基因组编辑技术,具有简单、高效、灵活、低廉等优点,被广泛应用于多个物种的基因组编辑研究中,成为了生命科学领域的革命性工具。利用该系统可以实现对基因组目标位点的碱基插入、缺失、替换等操作,及靶向激活或抑制基因的表达。与此同时,对CRISPR/Cas系统的不断改造以及新型Cas蛋白的功能开发,使CRISPR系统正逐步成为一个理想的遗传修饰工具。CRISPR-Cas12b/C2c1系统属于class 2中的type V-B型的基因编辑系统。Cas12b蛋白具有一个保守的RuvC结构域和一个Nuc结构域,该蛋白需要crRNA和tracrRNA的共同引导,识别富含AT的PAM序列,切割DNA双链,产生5’粘性末端。为了验证CRISPR-Cas12b系统能否在植物中起到基因组编辑的作用,我们选择来自于Bacillussp.V3-13(Bv)和Bacillus hisashii(Bh)的Cas12b蛋白在拟南芥原生质体中进行验证。首先,通过添加核定位信号和密码子优化,实现了两蛋白在拟南芥原生质体细胞中的入核表达。其次,选择拟南芥PDS3、FLS2、GL2和TT4基因为靶位基因进行基因编辑验证,Cas9蛋白作为对照。通过T7E1检测和深度测序验证编辑效率和编辑形式,结果显示在所检测位点两蛋白的编辑效率从0%-4.3%不等,且具有位点效应。编辑形式主要为在切割位点产生5-13bp的片段缺失。同时Cas12b蛋白可以进行双位点编辑和大片段缺失。并且,脱靶验证显示该蛋白不能容忍大于3bp的guide错配。最后,通过稳定转化拟南芥植株,成功得到了 Cas12b蛋白基因功能缺失的编辑突变体,证明该蛋白是一种可以在植物中进行基因编辑研究的工具。