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鸡球虫病对养鸡业的危害程度十分严重，全世界每年因鸡球虫病造成的损失超过20亿美元。最近的研究证明主要由堆型艾美耳球虫感染引起的亚临床型球虫病对养鸡业造成的损失有时要比临床型球虫病大的多，因此对堆型艾美耳球虫进行专门详尽的深入研究是非常必要的。本文建立了针对鸡堆型艾美耳球虫裂殖子抗原的鼠源抗体基因文库，并对其进行了初步鉴定。本试验利用单卵囊分离技术从鸡场分离了四株纯种艾美耳球虫卵囊，经增殖纯化后，提取卵囊基因组DNA，用特异性引物进行PCR扩增鉴定，结果显示其中两株为纯种鸡堆型艾美耳球虫。将增殖的卵囊接种无球虫感染的健康雏鸡，确定提取裂殖子的最佳时间为接种后56小时；并进行第二代裂殖子的提取纯化试验。纯化的裂殖子经超声裂解，高速离心，取上清，得到裂殖子可溶性抗原。将提取的堆型艾美耳球虫裂殖子可溶性抗原与等量佐剂乳化，免疫BALB／C小鼠。采取免疫小鼠的血液，制备阳性血清，应用本实验室建立的间接ELISA方法检测抗体效价，取抗体效价高的小鼠作为脾脏供体。提取脾脏的总RNA，琼脂糖凝胶电泳证明小鼠脾细胞总RNA提取成功。以提取的RNA为模板，利用引物Oligo（dT）15合成cDNA。根据小鼠抗体可变区的恒定区的氨基酸序列设计合成扩增鼠抗体轻链和重链可变区的兼并引物，并以cDNA为模板，扩增出轻链可变区和重链可变区基因。经琼脂糖凝胶电泳检测，发现轻链可变区基因的大小约390bp，重链可变区基因在420bp左右。从琼脂糖凝胶上切下所需DNA片段，用回收试剂盒回收轻链、重链可变区，经琼脂糖凝胶电泳检测回收产物，将回收的轻链基因等量混合即制成轻链可变区基因文库，将回收的重链基因等量混合，即制成重链可变区基因文库。轻链、重链分别与克隆载体PGM-T连接，转化于感受态细胞TOP10，蓝白斑法筛选出阳性重组子。提取阳性质粒DNA并测序。测序结果显示轻链可变区和重链可变区基因符合鼠抗体轻链可变区和重链可变区基因特征，与预期结果一致，证明鼠抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子抗体的轻链可变区基因文库和重链可变区基因文库构建成功。