论文部分内容阅读
胸腺素α原（prothymosinα,ProTα）是一个在体内分布广泛,进化上高度保守的强酸性蛋白质,分子量为1.3×104道尔顿。ProTα作为免疫调节因子已进入临床验证阶段。白介素2（Interleukin 2,IL-2）是一种免疫细胞生长因子,能显著提高自然杀伤细胞的活性,分子量为1.5×104道尔顿。临床上IL-2用于治疗癌症,但IL-2在临床治疗中常会带来不良反应。IL-2和ProTα协同作用于自体肿瘤的治疗效果明显强于单独使用IL-2的效果。除此以外,IL-2和ProTα的联合使用还能降低单独使用IL-2产生的毒副作用。根据前期研究构建的ProTα-IL-2融合序列,设计特异引物通过PCR的方法从克隆载体中扩增出融合基因,亚克隆到表达载体pET42a上,构建原核表达载体pET-PI。由于ProTα-IL-2融合基因序列中分布有13个E.coli稀有密码子,因此选用能提供稀有密码子tRNA的大肠杆菌表达菌株RossettaTM作为宿主菌。经过IPTG诱导表达出目的蛋白,经过SDS-PAGE电泳和Western blotting等实验表明成功表达出ProTα-IL-2融合蛋白。表达蛋白使用DEAE Sephrose FF阴离子交换层析纯化后,经E玫瑰花环实验和IL-2依赖细胞株CTLL-2的活性实验,表明目的蛋白同时具有ProTα和IL-2的生物学活性。本论文实验获得了具有ProTα和IL-2生物学活性的融合蛋白,为进一步将该融合蛋白开发成新药奠定了坚实的基础。