LepA是一种新报道的核糖体延伸因子,它在核糖体蛋白合成过程中起着重要的作用。LepA蛋白的结构和翻译因子如EF-G具有很高的结构相似性,都具有GTP酶活性。为了探究LepA的GTP酶水解机理,完善对GTP酶超家族水解的认识,我们设计了本文的实验。我们通过megaprimer PCR的方法构建了四个Lep A突变体,即T19A,R50A,N131A及S162A。这四个突变点都位于LepA蛋白I结构域的GTP结合中心附近,可能参与GTP的水解过程。我们对这几个位点做的是负性突变。然后把含有LepA突变基因的质粒转入大肠杆菌细胞内,进行IPTG诱导表达。利用纯化的LepA蛋白,测定这几个突变蛋白以及野生型LepA蛋白的酶动力学参数。实验结果显示,虽然这几个突变蛋白和野生型LepA蛋白的酶活性有所不同,但是,突变蛋白都具有明显的GTP酶活性。本文的实验结果表明,这几个位点对于LepA.的GTP水解过程不是必需的。