【摘 要】
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本研究以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa) 905为材料,发现微囊藻所带细菌不易除去。根据对微囊藻905生长过程的观察,采用毛细管挑取,固体液体培养基交替培养的方法,分离
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本研究以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa) 905为材料,发现微囊藻所带细菌不易除去。根据对微囊藻905生长过程的观察,采用毛细管挑取,固体液体培养基交替培养的方法,分离纯化获得无菌微囊藻905A,经过16SrDNA测序,该藻与两株铜绿微囊藻的标准株843,7806相似度均仅为93%,与一株未培养微囊藻相似度为100%,后者仅被定义为微囊藻属(Microcystis sp.)。通过改变铜绿微囊藻的生长条件研究藻菌关系,发现所带细菌与微囊藻有密切的关系,二者在生长关系上具有互相刺激,互相促进的作用。附生细菌B905-1不存在时,微囊藻905细胞不能在BG11固体培养基上分裂繁殖,小于102个/ml浓度的微囊藻905也不能在BG11液体培养基上生长繁殖;当细菌存在时,30%左右的单个藻细胞可以在BG11固体培养基中分裂,小于102个/ml浓度的微囊藻905也可以在液体BG11培养基中生长。附生细菌B905-1对微囊藻905的刺激作用是直接刺激,无菌滤液不起作用。当外加牛肉膏培养基等有机物或者直接添加附生细菌时,在液体BG11培养基中细菌数量高于自然状态中的70倍,在固体BG11培养基中藻菌数量达到1:1时,附生细菌可以裂解微囊藻以获得营养。通过对微囊藻905和微囊藻905A的研究,发现二者对有机物添加反应不同。2%的牛肉膏培养基可以裂解带菌微囊藻,对无菌微囊藻无裂解效应。从武汉周边土壤中分离得到芽孢杆菌T1,对微囊藻905的抑藻率可以达到97%以上,经过发酵优化选择四号培养基作为发酵培养基,37℃发酵抑藻率可以达到95.7%。经过测试,芽孢杆菌无菌滤液对带菌微囊藻和无菌微囊藻都具有溶藻效果,对无菌微囊藻的抑藻效果更加明显。通过对T1菌株的l6S rDNA测定分析及形态观察,将T1菌株初步鉴定为枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens orBacillus subtilis)。实验结果表明, T1菌株所产生的活性物质主要存在于无菌滤液中,且对121℃高温处理耐受。T1菌株发酵液对小球藻有刺激生长的作用,对大白鼠无毒理作用。本课题还研究了一些其它溶藻物质,如玉米浆,链霉菌,并对溶藻机理进行初探。
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