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[目 的]膀胱癌是一个重要的全球公共卫生问题,2018年全球范围内最新癌症统计,膀胱癌的新发病率在恶性肿瘤中居第四位,病死率位居第八位。在我国,膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤,其在逐渐影响我国居民的健康状况。近年来越来越多的证据表明二甲双胍不仅具有显著的降糖作用,而且在多种类型癌症中也发挥重要的抗肿瘤作用,该机制主要与AMPK的活化、降低m TOR信号通路和蛋白的表达相关。而自噬作为癌症治疗的潜在新靶点,其自噬相关的m TOR信号途径,对于肿瘤细胞生长,增殖和存活均起着重要作用。所以该课题的研究可以为二甲双胍在临床泌尿系统肿瘤的预防和治疗中提供理论基础。[方法]采用膀胱癌细胞株BIU-87进行体外细胞实验,用MTT 比色实验检测对不同浓度二甲双胍在不同的作用时间BIU-87细胞的活力测定;采用透射电子显微镜(TEM)观察不同浓度不同时间二甲双胍处理组自噬体的形态及数量;采用细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)应用荧光显微镜检测膀胱癌细胞自噬体形态及数量;Western blot法检测不同浓度二甲双胍作用6小时,12小时,24小时后自噬标志性蛋白LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ的表达。采用Western blot法检测不同浓度二甲双胍作用24小时,48小时,分别检测自噬信号通路mTORC1介导的phospho-p70s6k,phospho-4EBP1;mTORC2介导的phospho-AKT,Ac tin的表达;分析m TOR信号通路及其下游蛋白的变化和表达,阐述自噬相关的部分信号通路机制。[结 果]二甲双胍对膀胱癌细胞的增殖作用有明显的抑制,且该抑制作用呈浓度依赖性和时间依赖性(p<0.05)。透射电子显微镜结果显示:与对照组相比,二甲双胍各处理组均可观察到自噬体的形成,且与MDC染色法结果一致,二甲双胍作用于膀胱癌细胞的自噬体形成数量明显增加,且呈浓度依赖性(p<0.05)。Western-blot检测显示二甲双胍处理组LC3B(即LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ)蛋白表达量较对照组明显升高(p<0.05)且自噬机制可能通过抑制膀胱癌细胞中的m TOR通路的mTORC1和mTORC2途径下游蛋白表达来实现,例如phospho-p70S6K1,phospho-4EBP1,phospho-AKT,Actin。[结论]二甲双胍作用于人膀胱癌细胞BIU-87后,其增值作用可受到显著抑制,且该抑制作用呈现显著浓度依赖性和时间依赖性。二甲双胍作用于人膀胱癌细胞BIU-87后,检测自噬标志蛋白LC3B的表达(即LC3-Ⅰ/Ⅱ<1),LC3-Ⅱ/Ac tin比值明显升高,表明二甲双胍可诱导自噬,产生自噬作用。二甲双胍作用于人膀胱癌细胞BIU-87后产生自噬作用,形成自噬体。随着二甲双胍浓度的增加,形成的自噬体数量明显增加,且自噬体形成数量呈显著浓度依赖性。二甲双胍作用于人膀胱癌细胞 BIU-87 后,mTORC1 介导的 phospho-p70s6k,phospho-4EBP1 蛋白的表达逐渐降低,且该蛋白表达呈浓度依赖性和时间依赖性。二甲双胍作用于人膀胱癌细胞BIU-87后,mTORC2介导的phospho-AKT蛋白的表达逐渐下降,该蛋白的表达呈浓度依赖性和时间依赖性。本研究可使我们对二甲双胍诱导的自噬进行有效干预,二甲双胍在临床泌尿系统抗肿瘤的应用中进行有效指导;二甲双胍药物治疗可能成为极具创新性、发展潜力且安全有效的膀胱肿瘤治疗新方法。