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本研究分为三个部分:
第一部分肝癌组织中survivin蛋白、PCNA的表达及其与预后的关系
目的:探讨人肝癌组织中survivin蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及其与预后的关系。
方法:应用免疫组织化学染色方法对46例原发性肝癌组织中survivin蛋白与PCNA的表达情况进行检测,并结合临床预后进行分析。
结论:survivin蛋白对促进肝癌细胞快速增殖具有重要作用,survivin蛋白的表达情况可以作为判断肝癌病人预后的重要指标。
第二部分RNA干扰对肝癌细胞survivin基因表达及细胞凋亡的影响
目的:探讨将survivin基因特异性小干扰性RaNA(small interfering RNA,siRNA)转染肝癌细胞hepG2对survivin基因表达及细胞凋亡的影响。
方法:将体外合成的survivin特异性的siRNA序列1、序列2和对照序列,通过Lipofectamin2000分组转染肝癌细胞hepG2,应用RT-PCR及Westcrn印迹方法检测肝癌细胞survivin mRNA和蛋白的变化,应用MTT法及流式细胞技术评价其对体外培养肝癌细胞增殖和凋亡的影响。
结论:Survivin基因特异性siRNA转染hepG2细胞可抑制survivin mRNA和survivin蛋白的表达,并可体外抑制肝癌细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡的发生。
第三部分:RNA干扰Survivin基因联合顺铂对肝癌HepG2细胞凋亡的影响
目的:探讨将survivin基因特异性小干扰性RNA(small interfering RNA,siRNA)转染肝癌细胞hepG2同时联合应用顺铂对survivin基因表达及细胞凋亡的影响。
方法:将体外合成的survivin特异性的siRNA序列和对照序列,通过Lipofectamin2000分组转染肝癌细胞hepG2,24小时后再加入顺铂。应用RT-PCR及Westem印迹方法检测肝癌细胞survivin mRNA和蛋白的变化,应用MTT法及流式细胞技术评价其对肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响。
结论:Survivin特异性siRNA转染肝癌细胞可抑制survivin mRNA和survivin蛋白的表达,顺铂对肝癌细胞hepG2的survivin基因表达并无影响,在体外抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡方面survivin特异性的siRNA和顺铂具有协同作用。