【摘 要】
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目的:通过建立小鼠肾缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury,IRI）模型,观察假手术组、缺血再灌注组以及高压氧（hyperbaric oxygenation,HBO）治疗组肾功能、肾组织病理学、细胞凋亡率及凋亡蛋白表达量的变化,探讨HBO治疗对缺血再灌注肾组织中凋亡相关蛋白表达的影响,以期进一步阐明HBO对肾IRI的治疗作用及机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分成
【基金项目】
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国家自然科学基金（编号:81460135）； 贵州省教育厅创新群体重大研究项目[黔教合KY字（2017）045]；
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目的:通过建立小鼠肾缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury,IRI）模型,观察假手术组、缺血再灌注组以及高压氧（hyperbaric oxygenation,HBO）治疗组肾功能、肾组织病理学、细胞凋亡率及凋亡蛋白表达量的变化,探讨HBO治疗对缺血再灌注肾组织中凋亡相关蛋白表达的影响,以期进一步阐明HBO对肾IRI的治疗作用及机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分成3组,即假手术组、IRI组以及HBO治疗组,每组分为1h、3h、6h、12h四个时间点,每个时间点6只小鼠。假手术组:仅切开腹腔,双侧肾蒂不阻断,于相应时点切取双肾及采血;IRI组:切开腹腔,双侧肾蒂阻断45min后开放血流,分别于再灌注后1h、3h、6h、12h切取双肾及采血;HBO治疗组:切开腹腔,双侧肾蒂阻断45min后开放血流,分别于再灌注后0h、2h、5h、11h时行HBO治疗1h,HBO治疗后切取双肾及采血。自动血生化分析仪检测血清SCr值,HE法观察小鼠肾组织病理学变化,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,通过免疫组织化学技术、RT-q PCR技术及Western blot检测Fas、FasLm RNA和蛋白的表达变化。结果:1.肾功能变化:肾IRI组SCr值在各时间点均显著高于假手术组（P<0.05）,HBO治疗后则显著降低（P<0.05）;假手术组内各时间点SCr值无明显差异;肾IRI组和HBO组内1h和3h比较差异无统计学意义,其余时间点SCr值差异显著（P<0.05）,随再灌注时间的延长,SCr值逐渐增高。2.肾组织病理变化:假手术组各时间点肾组织形态学正常,未见明显改变。肾IRI组在1h和3h时可见肾小管上皮细胞浑浊肿胀,6h时可见胞浆颗粒样变性,刷状缘消失,12h时可见管腔内可见少量坏死脱落的碎片,肾小管间质有少量出血,随再灌注时间延长病变呈逐渐加重的趋势。经HBO治疗后肾小管上皮细胞肿胀和间质出血等病变均有所减轻,在再灌注早期最明显。3.细胞凋亡情况:假手术组肾组织中偶见TUNEL阳性细胞,而IRI组的肾组织中可见TUNEL阳性细胞数较假手术组明显增加（P<0.01）,HBO治疗后TUNEL阳性细胞数显著降低（P<0.01）;假手术组内各时间点相比较阳性细胞数无明显差异,而IRI组和HBO组内各时间点相比较差异具有统计学意义（P<0.05）。4.免疫组化结果:Fas和FasL蛋白在肾组织中的表达变化规律一致,Fas、FasL主要表达于肾小管上皮细胞胞浆,肾小球无表达,而FasL蛋白在细胞核少量表达。相对定量分析显示:肾IRI组各时间点二者的表达量均显著高于假手术组（P<0.05）,HBO治疗后各二者的表达量均显著降低（P<0.05）;在假手术组内各时间点二者的表达量无明显差异,而在肾IRI组和HBO治疗组内各时间点二者的表达量均有明显差异（P<0.05）,随再灌注时间的延长,二者的表达量逐渐增加。5.RT-qPCR结果:Fas和FasL mRNA在肾组织中的表达变化规律也一致,二者在肾IRI组各时间点的表达量均显著高于假手术组（P<0.05）,HBO治疗后二者的表达量均显著降低（P<0.05）。在假手术组内各时间点二者的表达量无明显差异;IRI组和HBO治疗组内12h表达量较1h、3h、6h时明显增加（P<0.05）,且随再灌注时间的延长二者的表达量逐渐增加。6.Western blot结果:Fas和FasL蛋白在肾组织中的表达变化规律也基本类似,二者在肾IRI组各时间点的表达量均显著高于假手术组（P<0.01）,HBO治疗后二者的表达量则显著降低（P<0.05）。在假手术组内各时间点二者的表达量无明显差异,随再灌注时间的延长,二者的表达量均逐渐增加。在肾IRI组内1h和3h时二者的表达量无明显差异,其余时间点差异明显（P<0.05）;HBO治疗组内Fas蛋白各时间点的表达量均有显著差异（P<0.05）,而FasL蛋白表达量在1h和3h时无明显差异,其余时间点差异显著（P<0.05）。结论:1、肾IRI可能通过激活细胞凋亡Fas/FasL信号通路促进肾组织细胞凋亡,加重肾损伤;2、HBO治疗可通过抑制凋亡蛋白Fas和FasL的表达,减少肾组织细胞凋亡,进而减轻肾损伤。
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