【摘 要】
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猫博卡病毒(Feline Bocavirus,FBo V)是一种与猫腹泻相关的病毒,存在三种基因型,FBo V-1于2012年在中国香港首次被发现,这是世界首次发现猫博卡病毒的存在。之后在2014年,美国的研究人员发现了新的两种基因型即FBo V-2、FBo V-3。在中国东北地区也首次发现了猫博卡病毒。但是安徽地区是否存在FBo V尚无人报道,对其遗传进化信息也未有研究,而且目前对FBo V的检
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猫博卡病毒(Feline Bocavirus,FBo V)是一种与猫腹泻相关的病毒,存在三种基因型,FBo V-1于2012年在中国香港首次被发现,这是世界首次发现猫博卡病毒的存在。之后在2014年,美国的研究人员发现了新的两种基因型即FBo V-2、FBo V-3。在中国东北地区也首次发现了猫博卡病毒。但是安徽地区是否存在FBo V尚无人报道,对其遗传进化信息也未有研究,而且目前对FBo V的检测手段只有普通PCR,但检测灵敏度低容易造成漏诊,开发一种高效、灵敏性强的方法势在必行。本研究收集了来自安徽地区的猫粪便样本58份,并从中成功扩增出了5株FBo V的全基因组序列,序列分析显示这5株FBo V包含了2株FBo V-1、1株FBo V-2、2株FBo V-3。在遗传进化树的建立中,通过全基因序列和NS1的系统发育分析显示检出的5株FBo V分别与其基因型参考毒株形成了3个不同的簇,验证了三种不同的基因型的存在。但对比发现,NS1遗传进化树与全基因组序列遗传进化树存在较为不同的拓扑结构,表明重组事件发生的可能性。基因重组分析显示5株菌中存在2株重组菌株即MASCY1和HFTH-22,分别为FBo V-1与FBo V-2,根据Simplot软件分析,重组区域主要在NP1、VP1和VP2基因上。选择压力分析发现显示FBo V-1、FBo V-3都存在阳性突变位点更加趋向于突变,而FBo V-2无阳性突变位点,趋向保守。本研究是首次报道FBo V在安徽省流行,有助于进一步了解FBo V的系统发育和分子特征,为FBo V的预防提供参考。本研究基于SYBR Green I的定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,q PCR),首次创建荧光定量检测方法用于检测FBo V-1,有着灵敏度高、快速、特异性强等优点。基于保守的NS1成功构建了q PCR方法,特异性引物熔化曲线在83.0℃出现单一的溶解峰。敏感性实验结果表明,该方法的检出限为3.87×10~1拷贝/μL,常规聚合酶链反应的检出限为3.87×10~3copies/μL。特异性实验中,此方法检测他种猫病毒均为阴性,具有较好的特异性。组内、组间最高变异系数(CV%)分别为0.98%和1.42%。在临床标本检测中,共检测128份样本,分别进行q PCR和普通PCR检测,阳性检出率分别为7.0%(9/128)和4.7%(6/128)。综上所述,所建立的q PCR方法敏感性好,特异性高,重现性好。为快速、高效且经济地临床检测FBo V-1提供支持。
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