CT1型弓形虫卵囊灌胃昆明小鼠的虫体分布及组织病理学损伤研究

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为探究CT1型弓形虫卵囊对昆明小鼠的致病性,本研究以4周龄昆明小鼠作为研究对象,按照1个/只、10个/只、100个/只三个剂量对其灌胃CT1型弓形虫孢子化卵囊。在接种弓形虫卵囊后0.5h、2h、4h、6h、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、50d对小鼠进行人工处死,或固定自然死亡小鼠的组织器官,制成石蜡组织切片并进行免疫组织化学染色,不仅系统研究了急性感染(≤10d)中小肠、大肠、肠系膜淋巴结、大脑、眼球、舌、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺、膀胱、生殖器官等的虫体分布及其对应的组织病理损伤,也研究了慢性感染(≥50d)中小鼠体内弓形虫组织包囊的形成情况。本试验主要结果如下:1、猫粪中弓形虫卵囊的鉴定及获取。收集猫粪便,经蔗糖漂洗及离心等操作,在显微镜下对其鉴定并将卵囊孢子化。利用3.3%的Na OH中和后,按照高、中、低剂量对小鼠灌胃。结果显示:灌胃卵囊后的小鼠能够感染弓形虫,为后续实验的进行打下了基础。2、高剂量组中肠道感染结果显示:肠道的感染率达到84.4%,肠系膜淋巴结的感染率为69.7%。肠道在每个处死时间段均有感染。只有肠道发生感染的小鼠其肠系膜淋巴结才可能被感染。镜检发现肠道肌层有局灶性的坏死。小肠和大肠的肠腔、杯状细胞、淋巴细胞等位置均可观察到游离的滋养体或胞内的速殖子。肠系膜淋巴结肿大,存在局灶性组织坏死,有水肿和充血等病理损伤。3、虫体在全身脏器中的分布显示:低剂量组与中剂量组均在0.5h时感染率最高,弓形虫感染率随着存活时间的延长而降低。高剂量组在每个处死时间段均有感染。整体看,随着剂量增高,阳性感染小鼠的数量也逐渐增多。镜检发现肺脏有严重充血,普遍存在血管周围炎;脾脏肿大且有局灶性或广泛性坏死;大脑损伤较轻,有散在的坏死和炎性病灶,偶尔可见大脑白质区域神经胶质细胞增多所造成的损伤,同时也可观察到血管周围炎;部分小鼠肝细胞坏死,门管区有巨噬细胞浸润。低倍镜下肝脏坏死灶数量多且损伤严重。通过镜检发现小鼠的器官损伤程度由重到轻依次为肺脏>肝脏>脾脏>肠系膜淋巴结>肾上腺>肾脏>大脑>骨骼肌>心脏>其它。通过免疫组织化学结果分析,所有组织器官中弓形虫检出率从高到低依次为肠系膜淋巴结(33.33%)、脾脏(10.81%)、骨骼肌(6.31%)、心脏(5.41%)、眼球(5.41%)、大脑(4.50%)、肝脏(3.60%)、肾脏(3.60%)、舌(1.80%)、肺脏(1.80%)、肾上腺(0.90%)。4、急性死亡小鼠病例中(≤10d),肠系膜淋巴结、心脏、大脑、肺脏、骨骼肌、脾脏、肝脏中可观察到数量众多的含有速殖子的假包囊。5、慢性感染小鼠中(≥50d),有一只小鼠MAT检测为弓形虫感染,大脑组织压片发现其形成了含有缓殖子的组织包囊。6、将慢性感染MAT阳性昆明小鼠大脑组织皮下注射给健康昆明小鼠,小鼠平均死亡时间为9.5d且肺脏涂片检查均为弓形虫阳性。再将获得的肺脏研磨后皮下注射健康昆明小鼠,小鼠平均死亡时间为10.25d且肺脏涂片检查均为弓形虫阳性。本研究成功的将CT1型弓形虫卵囊在昆明小鼠体内进行了卵囊→速殖子→缓殖子→速殖子的生活史复制。
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