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目的：
黄芩苷为黄酮类化合物，具有显著的抗病毒活性和生物活性。本实验目的在于研究中药单体黄芩苷体外抗腮腺炎病毒（Mumps virus，MuV）感染非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）的效果，观察其细胞病变效应(Cytopathic effect，CPE)、核酸复制水平及核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein，NP）表达情况，初步分析中药单体黄芩苷是否具有体外抗MuV感染的作用、其抗MuV的作用机理及探索新的有效抗MuV中药。
方法：
制备MuV感染Vero细胞模型，依据Read-Muench法计算半数组织培养感染量（Median tissue culture infective dosage，TCID50），以确定MuV的毒力；采用四甲基偶氮唑盐比色（Methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法和细胞观察法确定二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxid，DMSO）的最大无毒浓度（Maximum non toxic concentration，TC0），实验药物黄芩苷和阳性对照药利巴韦林的TC0和最小有效浓度（Maximum non toxic concentration，MEC）来筛选合适的实验药物浓度。
采用CPE抑制实验，最大有效浓度黄芩苷通过预防给药方式、治疗给药方式及直接灭活给药方式，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction，Real-time RT-PCR）方法，根据增值曲线计算三种不同给药方式不同时间点（24h、48h、72h、96h和120h）的核酸拷贝数，并在核酸复制水平方面探讨三种不同给药方式黄芩苷体外抗MuV的作用。
采用Western-blot的方法研究治疗给药方式（黄芩苷治疗给药组和利巴韦林治疗给药组）及预防给药方式（黄芩苷预防给药组和利巴韦林预防给药组）在MuV感染Vero细胞第5天时NP蛋白表达水平（灰度值），通过差异分析来探讨黄芩苷体外抗MuV的作用。
结果:
(1)依据Read-Muench法测得TCID50=10-4.35/0.1mL；通过MTT法测得DMSO的TC0为1.25％；黄芩苷的TC0及MEC分别为100μg/mL、12.5μg/mL，治疗指数(Therapeutic index，TI)为8；利巴韦林的TC0及MEC分别为50μg/mL、6.25μg/mL，TI也为8。
（2）Real-time RT-PCR检测治疗给药方式下MuV核酸复制情况，与MuV对照组相比，黄芩苷治疗给药组和利巴韦林治疗给药组的复制量均降低，具有显著性差异(P＜0.001)。直接灭活给药方式，与MuV对照组相比，黄芩苷直接灭活给药组和利巴韦林直接灭活给药组（除第72h）扩增曲线的拷贝数值有差异，但无统计学意义（P＞0.05）。预防给药方式下，与MuV对照组相比，黄芩苷预防给药组核酸复制量降低，第24h（P＜0.05）、第48h（P＜0.01）及第72h、96h、120h（P＜0.001），具有显著性差异；利巴韦林预防给药组核酸复制量也降低，第24h（P＜0.01），第48h、72h、96h、120h（P＜0.001），具有显著性差异。
（3）分析NP蛋白表达水平，治疗给药方式下，与MuV对照组相比，黄芩苷治疗给药组及利巴韦林治疗给药组细胞裂解液内NP蛋白表达含量下降，具有显著性差异（P＜0.01、P＜0.001）；与利巴韦林治疗给药组相比，黄芩苷治疗给药组NP蛋白含量上升，具有统计学意义（P＜0.05）。预防给药方式下，与MuV对照组相比，黄芩苷预防给药组及利巴韦林预防给药组细胞裂解液内NP蛋白表达下降，具有显著性差异（P＜0.001）；与利巴韦林预防给药组相比，黄芩苷预防给药组NP蛋白表达存在差异，但无统计学意义（P＞0.05）。
结论：
本研究证实了黄芩苷具有体外抗MuV的作用，填补了黄芩苷单体体外抗MuV实验研究的空白。黄芩苷在实验中表现出良好的抗MuV效应，为低毒高效的抗MuV药物。黄芩苷在预防、治疗及直接灭活三种给药方式下，预防给药及治疗给药方式均可减轻MuV感染Vero细胞的CPE程度、核酸复制及NP蛋白表达，黄芩苷体外对MuV增殖有明显的抑制作用；直接灭活给药方式体外无抗MuV作用。黄芩苷在一定浓度，通过抑制病毒在感染的Vero细胞内生物合成（治疗给药方式）及阻止病毒吸附细胞作用（预防给药方式）而发挥抗病毒作用，降低MuV感染宿主风险。治疗给药方式利巴韦林治疗给药组较黄芩苷治疗给药组抗MuV作用佳，预防给药方式黄芩苷预防给药组及利巴韦林预防给药组抗MuV效果相似。
黄芩苷为黄酮类化合物，具有显著的抗病毒活性和生物活性。本实验目的在于研究中药单体黄芩苷体外抗腮腺炎病毒（Mumps virus，MuV）感染非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）的效果，观察其细胞病变效应(Cytopathic effect，CPE)、核酸复制水平及核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein，NP）表达情况，初步分析中药单体黄芩苷是否具有体外抗MuV感染的作用、其抗MuV的作用机理及探索新的有效抗MuV中药。
方法：
制备MuV感染Vero细胞模型，依据Read-Muench法计算半数组织培养感染量（Median tissue culture infective dosage，TCID50），以确定MuV的毒力；采用四甲基偶氮唑盐比色（Methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法和细胞观察法确定二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxid，DMSO）的最大无毒浓度（Maximum non toxic concentration，TC0），实验药物黄芩苷和阳性对照药利巴韦林的TC0和最小有效浓度（Maximum non toxic concentration，MEC）来筛选合适的实验药物浓度。
采用CPE抑制实验，最大有效浓度黄芩苷通过预防给药方式、治疗给药方式及直接灭活给药方式，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction，Real-time RT-PCR）方法，根据增值曲线计算三种不同给药方式不同时间点（24h、48h、72h、96h和120h）的核酸拷贝数，并在核酸复制水平方面探讨三种不同给药方式黄芩苷体外抗MuV的作用。
采用Western-blot的方法研究治疗给药方式（黄芩苷治疗给药组和利巴韦林治疗给药组）及预防给药方式（黄芩苷预防给药组和利巴韦林预防给药组）在MuV感染Vero细胞第5天时NP蛋白表达水平（灰度值），通过差异分析来探讨黄芩苷体外抗MuV的作用。
结果:
(1)依据Read-Muench法测得TCID50=10-4.35/0.1mL；通过MTT法测得DMSO的TC0为1.25％；黄芩苷的TC0及MEC分别为100μg/mL、12.5μg/mL，治疗指数(Therapeutic index，TI)为8；利巴韦林的TC0及MEC分别为50μg/mL、6.25μg/mL，TI也为8。
（2）Real-time RT-PCR检测治疗给药方式下MuV核酸复制情况，与MuV对照组相比，黄芩苷治疗给药组和利巴韦林治疗给药组的复制量均降低，具有显著性差异(P＜0.001)。直接灭活给药方式，与MuV对照组相比，黄芩苷直接灭活给药组和利巴韦林直接灭活给药组（除第72h）扩增曲线的拷贝数值有差异，但无统计学意义（P＞0.05）。预防给药方式下，与MuV对照组相比，黄芩苷预防给药组核酸复制量降低，第24h（P＜0.05）、第48h（P＜0.01）及第72h、96h、120h（P＜0.001），具有显著性差异；利巴韦林预防给药组核酸复制量也降低，第24h（P＜0.01），第48h、72h、96h、120h（P＜0.001），具有显著性差异。
（3）分析NP蛋白表达水平，治疗给药方式下，与MuV对照组相比，黄芩苷治疗给药组及利巴韦林治疗给药组细胞裂解液内NP蛋白表达含量下降，具有显著性差异（P＜0.01、P＜0.001）；与利巴韦林治疗给药组相比，黄芩苷治疗给药组NP蛋白含量上升，具有统计学意义（P＜0.05）。预防给药方式下，与MuV对照组相比，黄芩苷预防给药组及利巴韦林预防给药组细胞裂解液内NP蛋白表达下降，具有显著性差异（P＜0.001）；与利巴韦林预防给药组相比，黄芩苷预防给药组NP蛋白表达存在差异，但无统计学意义（P＞0.05）。
结论：
本研究证实了黄芩苷具有体外抗MuV的作用，填补了黄芩苷单体体外抗MuV实验研究的空白。黄芩苷在实验中表现出良好的抗MuV效应，为低毒高效的抗MuV药物。黄芩苷在预防、治疗及直接灭活三种给药方式下，预防给药及治疗给药方式均可减轻MuV感染Vero细胞的CPE程度、核酸复制及NP蛋白表达，黄芩苷体外对MuV增殖有明显的抑制作用；直接灭活给药方式体外无抗MuV作用。黄芩苷在一定浓度，通过抑制病毒在感染的Vero细胞内生物合成（治疗给药方式）及阻止病毒吸附细胞作用（预防给药方式）而发挥抗病毒作用，降低MuV感染宿主风险。治疗给药方式利巴韦林治疗给药组较黄芩苷治疗给药组抗MuV作用佳，预防给药方式黄芩苷预防给药组及利巴韦林预防给药组抗MuV效果相似。