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目的:阻塞性黄疸是肝胆胰外科实践中常见的临床病症,长期胆道阻塞会引起胆汁淤积造成肝损伤、进而形成肝纤维化,最终导致胆汁淤积性肝硬化,严重者可致肝功能衰竭。阻塞性黄疸肝损伤增加了围手术期的并发症和死亡率,探索其损伤机制和有效的治疗手段具有重要的临床意义。近年来研究发现,NLRP3炎症小体在肝脏疾病的发生发展中起重要作用,是引起肝脏炎症疾病的重要原因。本研究旨在探讨抑制NLRP3炎症小体对阻塞性黄疸肝损伤及肝纤维化的影响及其机制。方法:制备阻塞性黄疸小鼠模型,6-8周雄性C57/B6J小鼠随机分成3组,A组为假手术组(对照组),B组为胆总管结扎组(Bile duct ligation,BDL),C组为NLRP3抑制剂MCC950治疗组。B组和C组行胆管结扎术,A组仅打开腹腔,游离但不结扎胆总管。C组小鼠经腹腔注射给予溶于0.9%生理盐水的MCC950,10mg/kg体重/天。A组和B组小鼠采用同样方式给予等体积的0.9%生理盐水,7天后处死3组小鼠。比较对照组与实验组肝功能指标(AST、ALT、TBIL);H&E染色、天狼星红染色评估肝脏组织学改变;TUNEL法检测小鼠肝细胞死亡情况;ELISA法检测血清细胞因子IL-1β、IL-18水平;免疫组化检测MPO、F4/80、α-SMA、NLRP3蛋白的表达;q RT-PCR检测肝脏组织内NLRP3、Caspase1、IL-1β、MPO、TGFβ1、α-SMA、Col1a1的m RNA表达;Western blotting检测肝脏组织内NLRP3、caspase1、IL-1β蛋白水平;对BDL组及MCC950组小鼠肝组织进行转录组测序并对测序结果进行RT-PCR法验证,探讨MCC950对阻塞性黄疸肝损伤的其他保护机制。结果:与假手术组相比,胆总管结扎小鼠血清AST、ALT显著升高;H&E染色显示肝脏大量凝固性坏死灶,伴有炎性细胞浸润和小胆管增生;天狼星红染色显示肝汇管区大量胶原纤维组织沉积,肝组织中TGFβ1、α-SMA、Col1a1m RNA水平增加;IHC提示肝脏内中性粒细胞及巨噬细胞浸润;TUNEL染色显示大批肝细胞死亡;血清炎性细胞因子IL-1β、IL-18水平明显上升,肝脏组织内NLRP3、caspase1、IL-1βm RNA及蛋白水平上升。肝脏组织中CD14、CXCL10、CCL5、STAT1、TLR2、IKBKE的m RNA表达水平上升,表明小鼠胆汁淤积造模成功。相反,在使用MCC950治疗后小鼠血清AST、ALT显著降低;H&E染色显示肝脏炎症反应降低,坏死灶面积减小、数量减少;肝组织中TGF-β1、α-SMA、Col1a1表达水平降低,天狼星红染色显示肝纤维化程度明显减轻;肝脏内中性粒细胞浸润减少;TUNEL染色显示肝细胞死亡明显减少;血清炎性细胞因子IL-1β、IL-18水平明显降低,肝脏组织内NLRP3、Caspase1、IL-1β表达水平下降,均提示肝脏炎性反应减轻。肝脏组织中CD14、CXCL10、CCL5、STAT1、TLR2、IKBKE的m RNA表达水平下调。结论:1、在胆汁淤积情况下,NLRP3表达显著升高,MCC950抑制其表达后,肝功能和肝脏组织病理改变得到显著改善,证明NLRP3在阻塞性黄疸肝损伤中发挥重要作用。2、MCC950可以通过有效抑制NLRP3炎症小体表达,抑制胆总管结扎小鼠肝脏内炎性细胞浸润和肝细胞死亡,减轻阻塞性黄疸肝损伤和肝纤维化。3、MCC950可能通过抑制Toll样受体信号通路发挥对阻塞性黄疸肝损伤的保护作用。