实验目的:　　急、慢性咽炎为临床常见病，其发病率高，症状顽固，容易复发。从临床用药经验来看，中医药对其具有独特的疗效。复方利咽口服液系由十余味纯中药组成的复方制剂，为经验方。具有清热解毒、利咽生津、软坚散结的功效。临床主要用于治疗急、慢性咽炎，扁桃体炎等。但现阶段急、慢性咽炎有针对性的动物模型较少，尤其慢性咽炎动物模型报道甚少，且尚未见有关细菌感染引起的慢性咽炎动物模型，因此建立此方面的动物疾病模型十分必要。　　本文旨在探索并建立实验性急、慢性咽炎动物模型，以期为治疗急、慢性咽炎药物临床前有效性评价研究提供合理的动物疾病模型。同时对复方利咽口服液治疗急、慢性咽炎的作用及机制进行了研究，为临床合理用药提供药理实验依据。　　实验方法:　　一、建立急、慢性咽炎动物模型　　采用临床呼吸道常见的上呼吸道感染的致病菌一次性或多次感染SD大鼠咽部粘膜的方法造成实验性急、慢性咽炎动物模型，从细菌浓度、感染方式、感染频次等方面进行了考察，并从症状体征、病理形态学、免疫组化法等方面对动物模型进行评价。　　二、复方利咽口服液药效学研究　　1.体外抑菌作用采用试管二倍稀释法分别测定复方利咽口服液对金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌，白色念珠菌、白色葡萄球菌和大肠埃希菌的最小抑菌浓度(MIC);2.抗炎作用采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型、羧甲基纤维素钠致小鼠腹腔白细胞游走动物模型，观察复方利咽口服液对急性、亚急性炎症动物模型的抗炎作用;3.止咳化痰作用采用小鼠气管酚红排泌实验和小鼠氨水引咳实验，观察复方利咽口服液的止咳化痰作用;4.镇痛作用采用小鼠热板法和醋酸致小鼠扭体法，观察复方利咽口服液镇痛作用。　　三、复方利咽口服液对实验性急、慢性咽炎动物模型的治疗作用与机制研究　　1、对急性咽炎动物模型的治疗作用与机制研究采用上呼吸道致病菌感染大鼠咽部粘膜的方法造成大鼠实验性急性咽炎动物模型，观察复方利咽口服液对大鼠急性咽炎模型动物的临床症状、血清IL-1β、IL-6β、TNF-α、ICAM-1及CRP的表达以及对病理形态学的影响。　　2、对慢性咽炎动物模型的治疗作用与机制研究采用上呼吸道致病菌感染大鼠咽部粘膜的方法造成大鼠实验性慢性咽炎动物模型，观察复方利咽口服液对大鼠慢性咽炎模型动物的临床症状、血清IL-1β、IL-6β、TNF-α、ICAM-1及CRP的表达以及对病理形态学的影响。　　本研究采用HE染色光镜观察动物咽部组织病理形态学变化，并对SD大鼠急、慢性咽炎血清样本进行测定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中ICAM-1，采用放射免疫检测法(RIA)检测血清中IL-1β、IL-6β、TNF-α，采用免疫比浊法检测血清中CRP的含量变化。　　实验结果:　　一、建立急、慢性咽炎动物模型咽部粘膜病理切片提示采用上呼吸道致病菌感染SD大鼠咽部粘膜建立实验性急、慢性咽炎动物模型局部与临床急性咽炎和慢性咽炎表现相似，符合急、慢性咽炎动物模型的生物学特征。　　二、复方利咽口服液药效学研究1.体外抑菌作用:复方利咽口服液对乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌有较好的抑菌作用;对金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌有一定的抑菌作用;对表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌，白色念珠菌、白色葡萄球菌和大肠埃希菌抑菌作用较弱。2.抗炎作用:复方利咽口服液高、中剂量组（11.19g生药/kg、5.60g生药/kg）能减轻二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀度;能降低羧甲基纤维素钠致小鼠腹腔白细胞游走。3.止咳化痰作用:复方利咽口服液高剂量组（11.19g生药/kg）能增加小鼠呼吸道酚红排泌量;复方利咽口服液高、中剂量组（11.19g生药/kg、5.60g生药/kg）能延长小鼠咳嗽潜伏期，减少咳嗽次数。4.镇痛作用:复方利咽口服液高剂量组(11.19g生药/kg)能减少醋酸所致小鼠的扭体次数;复方利咽口服液高、中剂量组（11.19g生药/kg、5.60g生药/kg）能提高小鼠的痛阈值。　　三、复方利咽口服液对实验性急、慢性咽炎动物模型的治疗作用与机制研究　　1、对急性咽炎动物模型的治疗作用与机制研究①临床症状:与空白对照组相比:模型组大鼠体重增长缓慢，精神欠佳，咽部伴有黄色分泌物，药物治疗组上述症状有所缓解。②病理形态学:模型组较空白对照组相比:咽部粘膜上皮角化严重，钉突明显，粘膜上皮层明显增生，纤维组织增生，固有膜内可见小血管扩张，充血现象，大部分粘液腺上皮细胞坏死，大多形成空泡或无规则的排列形式。药物治疗组上述症状有所缓解:炎细胞浸润充血，腺体肥大，增生现象明显减少。③复方利咽口服液对模型动物血清中的IL-1β、IL-6β、ICAM-1及CRP的表达有明显的抑制作用，并能有效抑制模型组动物TNF-α的表达。　　2、对慢性咽炎动物模型的治疗作用与机制研究①临床症状:与空白对照组相比:造模动物在造模的二到三周体重增长缓慢，精神状态欠佳，频饮水，毛色不光泽，并且出现动物死亡现象，粘膜肿大，红肿，且伴有少量黄色分泌物。药物治疗组上述症状有所缓解。②病理形态学:模型组较空白对照组相比:咽部粘膜上皮角化严重，钉突明显，粘膜上皮层明显增生，可见弥漫性咽细胞浸润，纤维组织增生，固有膜内可见小血管扩张，充血现象，大部分粘液腺上皮细胞坏死，大多形成空泡或无规则的排列形式。药物治疗组可有效缓解缓解:粘膜及组织的炎细胞浸润、红肿、固有层充血、腺体的肥大、上皮增生等症状。③复方利咽口服液对模型动物血清中的IL-1β、IL-6β、ICAM-1及CRP的表达有明显的抑制作用，并能有效抑制模型组动物TNF-α的表达。　　实验结论:　　1、本研究首次采用上呼吸道感染致病菌感染大鼠咽部粘膜建立了细菌性急、慢性咽炎SD大鼠动物模型造模新方法，并为治疗急、慢性咽炎药物的临床前评价研究提供了新的动物疾病模型。　　2、本研究对复方利咽口服液的药效学进行评价，复方利咽口服液在抑菌、抗炎、止咳化痰、镇痛方面有一定的治疗效果。　　3、本研究从整体、细胞和分子水平，考察复方利咽口服液对实验性急、慢性咽炎的治疗作用与机制研究可知复方利咽口服液能明显改善急、慢性咽炎动物模型的炎症病变，抑制血清中IL-1β、IL-6β、ICAM-1炎症介质的产生，对抗TNF-α的生成，明显抑制肝脏对CRP的表达，抑制基质金属蛋白酶MMP-9在粘膜组织中的表达，提示这些作用可能是复方利咽口服液对抗急、慢性咽炎的部分作用机制。