论文部分内容阅读
目的:研究松果体摘除及补充褪黑素对大鼠胸腺CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)发育、输出及其相关基因Foxp3表达的影响,进一步了解松果体及褪黑素对胸腺细胞分化发育、机体免疫功能及肿瘤发生、发展的调控作用,从而丰富人类对神经-内分泌-免疫网络的认识。方法:①建立松果体摘除动物模型:选用2月龄雄性清洁级SD大鼠120只,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素腹腔注射7.5mg·kg-1·day-1组和松果体摘除+褪黑素腹腔注射15mg·kg-1·day-1组,术后4、8周取材,松果体摘除组动物腹腔注射等量生理盐水;②应用CD4和CD25免疫荧光双标染色和流式细胞检测技术观察并分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺及外周血双阳性细胞数量的变化;③应用RT-PCR方法及凝胶成像分析系统观察分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺Foxp3 mRNA量的变化;④应用免疫组织化学染色法和图像分析软件观察分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺Foxp3阳性细胞的变化。结果:与正常组、假手术对照组相比:①胸腺流式细胞检测结果显示松果体摘除术后无论4周或者8周胸腺CD4+CD25+Treg细胞数量无明显变化,补充褪黑素后双阳性细胞数量随时间推移、剂量增大而增加,术后8周高剂量组CD4+CD25+Treg细胞数较低剂量组略少,但与正常/假手术组相比双阳性细胞数量增加仍有显著性差异;②外周血流式细胞检测结果显示松果体摘除术后4周外周血CD4+CD25+Treg细胞数量明显增加,但补充褪黑素后恢复正常,而术后8周各组之间无显著性差异;③半定量RT-PCR及免疫组化结果示松果体摘除后4周大鼠胸腺Foxp3 mRNA水平明显升高,Foxp3阳性细胞面积增加,平均光密度增强,补充高低两种剂量褪黑素后均有所下降并达到正常水平,而松果体摘除后8周各组之间Foxp3 mRNA及蛋白水平的表达无明显差异。结论:松果体及褪黑素在影响胸腺细胞分化发育过程中,胸腺CD4+CD25+ Treg细胞也随之发生变化,松果体摘除对胸腺CD4+CD25+Treg细胞产生无明显影响,但导致大鼠胸腺Foxp3的转录和翻译明显增加,胸腺CD4+CD25+Treg细胞的输出增加,而补充外源性褪黑素后能逆转上述异常,长时间作用则其影响逐渐消失。故松果体及其褪黑素通过对胸腺CD4+CD25+Treg细胞的调节,可能是其促进机体的免疫功能及抑制肿瘤作用的机制之一。