【摘 要】
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【目的】探讨蛭岩消积方水提物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响,并基于基因芯片技术探讨蛭岩消积方调节肝癌细胞生物学行为的可能机制。【方法】首先通过Cell Titer GLO法检测3200、1600、800、400、200、100、50和25μg/m L浓度的蛭岩消积方水提物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50);选出的IC50（1500μg/m L
【基金项目】
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项目名称:蛭岩消积方医院制剂研制开发,项目合同编号:桂科AB18126066,项目来源:广西科技项目计划,项目起止时间:2019-2021
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【目的】探讨蛭岩消积方水提物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响,并基于基因芯片技术探讨蛭岩消积方调节肝癌细胞生物学行为的可能机制。【方法】首先通过Cell Titer GLO法检测3200、1600、800、400、200、100、50和25μg/m L浓度的蛭岩消积方水提物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50);选出的IC50（1500μg/m L）为高浓度,1000μg/m L为低浓度,通过Cell Titer GLO实验、CCK-8实验观察蛭岩消积方水提物干预不同时间对人肝癌SMMC-7721细胞增殖活性的影响;通过流式细胞术实验检测人肝癌SMMC-7721细胞水提物对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响。用1500μg/m L蛭岩消积方水提物干预SMMC-7721细胞48 h后,提取细胞总RNA,利用基因芯片技术,研究干预前后基因表达谱变化,以|Fold Change|>1.5且FDR<0.05为筛选标准,筛选干预前后的差异基因,用采用IPA分析软件进行疾病与功能分析,观察差异基因主要富集的疾病与功能;通过RT-PCR法对表达丰度下调的10个差异基因表达进行验证,筛选蛭岩消积方潜在的靶基因。将最终筛选出的潜在靶基因在GEPIA数据库中分析其在在肝癌组织中的表达及与患者预后的关系,最终选择一个靶基因进行后续研究。通过RNA干扰技术构建沉默序列,转染SMMC-7721细胞。基因沉默细胞株构建成功后,用1500μg/m L蛭岩消积方水提物继续干预48 h,通过Cell Titer GLO实验和CCK-8实验验证靶基因沉默对蛭岩消积方在调控细胞增殖作用的影响。【结果】（1）蛭岩消积方水提物对肝癌SMMC-7721细胞IC50为1500μg/m L。（2）不同浓度（1000μg/m L和1500μg/m L）的蛭岩消积方水提物干预人肝癌SMMC-7721细胞,均能显著性降低细胞的增殖活性。（3）不同浓度（1000μg/m L和1500μg/m L）的蛭岩消积方水提物均能显著性促进人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡,且高浓度组的效果优于低浓度组。（4）蛭岩消积方水提物干预能影响细胞基因表达谱,两组间共筛选出418个差异基因,其中,与空白组相比,干预组细胞中显著性上调基因共263,下调基因共155。（5）IPA分析软件显示与差异基因相关的疾病和功能前五位分别是组织损伤和异常（organismal injury and abnormalities）、癌症（Cancer）、细胞死亡和生存（Cell death and survival）、细胞发展（Cellular development）和组织发育（Tissue development）。（6）RT-PCR结果显示,蛭岩消积方干预后,HIST1H2BK、DNAJB6、ZBED1、PKDCC在细胞中的表达显著性降低。（7）GEPIA数据库分析显示,DNAJB6在肝癌组织中高表达,且与患者预后不良相关。（8）DNAJB6基因沉默能促进蛭岩消积方水提物对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用。【结论】（1）蛭岩消积方水提物能浓度和时间依赖性的抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,并诱导其凋亡。（2）DNAJB6可能是蛭岩消积方水提物抑制人肝癌SMMC-7721细胞的关键作用基因。（3）DNAJB6在肝癌组织中高表达,且与患者预后不良显著正相关。（4）蛭岩消积方水提物抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖并促进细胞凋亡的机制可能与下调DNAJB6基因表达有关。
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