miR-338-5p靶向作用于TRAF3参与肾移植术后抗体介导的免疫排斥

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenmin673594913
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目的:本课题旨在研究miR-338-5p在肾移植患者的表达特点,及其对BAFF信号的调控作用,进而探讨其在抗体介导的肾移植排斥中的作用及意义。方法:⑴采用共转染方法,利用双荧光素酶报告基因检测系统进行miR-338-5p的靶基因验证。⑵收集肾移植患者的血清(健康志愿者为对照),应用real-timePCR法检测患者血清中miR-338-5p的表达差异;ELISA法检测血清sBAFF的表达量;液相芯片技术检测血清中抗HLA-Ⅰ类抗体、抗HLA-Ⅱ类抗体、抗MICA抗体滴度。从而分析miR-338-5p、sBAFF、抗体间的相关性。⑶在体外试验中,采用以抗IgM抗体和/或重组人BAFF蛋白刺激的CD20+扁桃体B细胞培养体系,观察miR-338-5p激动剂/拮抗剂、及TRAF3siRNA干扰作用下,B细胞分泌IgG、IL-10的水平,来分析miR-338-5p对B细胞生物学功能的影响。采用SPSS17.0统计软件包进行分析。两个独立样本均数间的比较采用双侧t检验;配对样本均数间的比较采用配对样本t检验;相关性分析采用Spearman法及Pearson法;P<0.05被认为具有统计学意义。结果:⑴双荧光素酶报告基因检测系统验证结果表明TRAF3和NF-κB1均是miR-338-5p的靶分子,TRAF3被负向调控,NF-κB1被正向调控;⑵与健康对照组比较,肾移植受者血清miR-338-5p水平显著下降(P<0.001)、血清sBAFF水平显著增高(P<0.01)。移植术后1年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后1年以上者(P<0.01);移植术后3年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后3年以上者(P<0.01);⑶对全部研究对象进行统计分析显示,血清miR-338-5p与sBAFF、抗HLA-Ⅱ抗体均呈显著负相关,相关系数分别为-0.51(P<0.001)、-0.322(P<0.05);术后3年内者,血清miR-338-5p与抗HLA-Ⅱ抗体、抗MICA抗体均呈显著负相关,相关系数分别为-0.423(P<0.05)、-0.411(P<0.05);术后3年以上者,血清miR-338-5p与抗MICA抗体、抗HLA&MICA抗体均呈显著正相关,相关系数分别为0.486(P<0.05)、0.578(P<0.01);⑷CD20+B淋巴细胞的体外培养试验结果显示,存在BAFF信号共同作用时,miR-338-5p经靶向作用于TRAF3增强了BAFF信号,使得B细胞分泌IgG显著增多(132±5.29ng/mlvs155±5.57ng/ml,P<0.05)。结论:miR-338-5p经靶向作用于TRAF3,间接调控BAFF信号,参与肾移植术后免疫反应过程,影响移植肾长期存活。
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