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同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)即2-氨基-4-巯基丁酸,又称高半胱氨酸,是一种含硫氨基酸,是甲硫氨酸(Met)代谢的中间产物。近年来,人们日益注意到人体内的Hcy水平与健康之间的关系密切。Hcy作为一个独立的心血管疾病的风险指标已被广泛接受。Hcy的测定对预防和治疗心血管疾病和其他与Hcy水平相关的疾病有重要的临床意义。目前,血浆Hcy的测定主要采用高效液相色谱技术(HPLC)及荧光偏振免疫技术来进行,但由于时间和价格因素,这些方法仅在大医院或检验中心应用。而酶促比色法与以上方法相比具有更便宜、简捷的特点,因此如能应用于同型半胱氨酸的测定,将是一种更理想的方法。 在酶促比色法中,同型半胱氨酸酶(EC 4.4.1.2)是所需要的一个必需的酶,因此它的性质对该方法的使用和推广非常重要。虽然已有少量文献对此类酶进行了报道,但在这些已报道的酶中,大多数都存在着专一性不高的问题。 本研究从土壤中分离筛选到一株产同型半胱氨酸酶菌株N2-1,对其进行了系统地分类学鉴定,并研究了该菌株产同型半胱氨酸酶的发酵条件,对粗酶的一些性质进行了研究。主要实验结果如下: 1、菌株的筛选及鉴定 经过富集培养划线分离纯化后,得到5株产同型半胱氨酸酶菌株,通过对酶活性和专一性的分析,菌株N2-1表现出较高的同型半胱氨酸酶活性和专一性,因此确定菌株N2-1为最佳产酶菌株。通过对该菌株的形态学观察,生理生化特性测定及16S rDNA测序和系统发育分析,确定菌株N2-1属于沙雷氏菌属(Serratia sp.)。 2、菌株产酶发酵研究 对菌株N2-1产酶发酵的条件进行了研究。研究采用摇瓶培养试验,以测定菌体生长量、酶活性为指标,确定了该菌株产酶发酵的最佳条件为,培养基组成:0.5%蛋氨酸,4.0%酵母膏,1.4%葡萄糖,0.2%K2HPO4·3H2O,0.05%KH2PO4,0.05%MgSO4·7H2O,1.0%(v/v)微量元素溶液(5.2% ZnSO4,5.0% FeSO4·7H2O,5.0% CuSO4·7H2O和0.05% MnSO4·H2O),pH 6.5。培养温度30℃,