【摘 要】
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目的利用杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)制备HBV核心颗粒,以用于新型抗病毒药物体外抗病毒活性的实验研究。方法构建含有乙型肝炎病毒聚
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目的利用杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)制备HBV核心颗粒,以用于新型抗病毒药物体外抗病毒活性的实验研究。方法构建含有乙型肝炎病毒聚合酶基因(HBV P基因)和核心蛋白基因(HBV C基因)的重组质粒pFastbac Dual-P-C,转化大肠杆菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞,获得含有HBV P基因和C基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染昆虫Sf9细胞进行蛋白表达,然后通过免疫共沉淀纯化目的蛋白,行SDS-PAGE电泳与银染及RT-PCR检测各成分。结果成功构建了含HBV P基因和C基因的重组杆状病毒,且能在昆虫细胞中表达目的蛋白并进行纯化,纯化产物中含HBV聚合酶、核心蛋白和RNA。结论利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,能成功地构建出含HBV P基因和C基因的重组杆状病毒,在昆虫细胞中进行表达,并纯化出HBV核心颗粒,为进一步研究新型抗HBV药物的作用机制等奠定了基础。
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