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目的:研究小鼠心肌SCN5A基因在低硒和高硒状态下表达量的变化以及SCN5A基因是否发生选择性剪接。
方法:应用低硒合成饲料和饮水中加亚硒酸钠的方法,喂养4周龄C57BL雄性小鼠,建立低硒和高硒小鼠模型。低硒组与高硒组采用低硒饲料喂养(硒含量为0.004mg/kg),高硒组饮用水为硒水(硒含量为0.15mg/L),硒水由亚硒酸钠配制。正常组以常规饲料平行喂养(硒含量为0.04mg/kg)。分别在第23天、第46天、第69天和第90天,采用原子吸收法检测小鼠肝脏硒含量,确定低硒与高硒小鼠模型建立成功。并在第30天和第90天抽提心室肌总RNA进行小鼠全基因组表达谱芯片检测。电镜、光镜观察小鼠心肌组织病理学变化。通过RM6240B/C生物信号采集处理系统检测小鼠心电图变化。采用RT-PCR方法检测各实验组心室肌SCN5A基因表达变化。将小鼠心肌SCN5A基因编码mRNA分为9个片段,应用逆转录聚合酶链反应扩增相应目的片段,观察SCN5A基因表达量变化,并对扩增产物直接测序,观察是否有异常选择性剪接发生。应用同样技术对NIH、ICR、KM、BALB/c小鼠进行同样观察。
结果:成功建立低硒小鼠与高硒小鼠模型;心肌光镜观察显示:正常心肌无明显变化,低硒组与高硒组都出现心肌细胞疏松化。电镜观察显示,低硒组可见大量脂滴,部分肌节明显缩短,出现肌丝溶解,并有肌浆网扩张,线粒体明显增多。高硒组出现大量肌浆网扩张,脂滴数量少,线粒体肿胀。低硒小鼠心电图显示:R波增高(66%,4/6),T波增高(83%,5/6),ST段上移(66%,4/6),高硒小鼠心电图显示:R波降低(33%,2/6)无增高,T波降低(100%,6/6),ST段下移(33%,2/6);SCN5A基因在低硒状态下表达量降低,而在高硒水平和正常硒水平无明显改变;在NIH、ICR、KM和BALB/c小鼠的心肌和骨骼肌的SCN5A基因均存在选择性剪接。
结论:低硒或高硒均能引起小鼠心电图变化。小鼠心肌SCN5A基因在低硒状态下表达量降低。NIH、ICR、KM和BALB/c小鼠心肌和骨骼肌的SCN5A基因均存在选择性剪接。但与硒水平的高低无关。