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红掌(Anthurium)为天南星科(Araceae)花烛属(AnthuriumSchott)多年生草本植物,最初发现于中南美洲的热带和亚热带雨林地区,具有优美的佛焰苞片、肉穗花序,主要作为切花、盆栽花卉植物进行生产和交易,具有极高的观赏价值。红掌属于日中性植物,具有周年开花的习性,但存在童期较长,花量及品质易受外界温度、光照等不良环境影响的问题,深入了解红掌开花的分子生理机制,对制定合理化的生产管理措施,及开展花期调控相关的分子育种具有积极意义。本文针对植物开花及胁迫响应相关的AaFT1、AaPFT1基因进行了克隆及表达规律研究,以期为后续机制解析奠定基础,主要结果如下:(1)通过对AaFT1基因定量RT-PCR分析表明:AaFT1在红掌’热情’各个组织中普遍表达,其中嫩肉穗花序和花梗中表达量较高;成年期表达量高于苗期,佛焰苞和肉穗的盛花期高于初花期;在叶和花的不同发育阶段,AaFT1在幼嫩组织中表达量较高;在一年的生长周期内,叶片中AaFT1在1、2月份表达量较高,佛焰苞中AaFT1在9、10、11月份表达量较高,肉穗花序中AaFT1在1、2、3月份表达量较高。红掌‘卫城’的外源激素处理表明:AaFT1能被ET、ABA、MeJA和SA诱导持续下调,而GA处理早期无显著变化。(2)结合采用Tail PCR和Hi-Tail PCR技术,克隆了 2067 bp AaT1启动子片段。利用PLANTCARE和PLACE在线工具分析,表明其含有大量的顺式作用元件:其中含有真核基因启动子的基本结构CAAT-box和TATA-box元件,与激素相关、热应激反应和抗病胁迫相关的响应元件,说明该基因在生物和非生物胁迫方面具有调控作用;含有与光照有关的调控元件,增强子元件以及高转录水平顺式作用元件;含有与代谢有关的元件,如GCN4_motif、ARE等;也含有调控昼夜节律的顺式作用元件circadian。克隆的AaFT1的启动子转录活性分析初步得出其具有启动活性,并对其结构进行分析推测,为了解AaFT1基因的功能和表达调控奠定了基础。(3)将AaFT1与原核表达载体pET32(a)+融合在大肠杆菌Rosetta中高效表达了带有6×His标签的蛋白,并制备小鼠抗血清,为后续研究AaFT1编码蛋白的时空分布及在开花途径中的功能提供基础。(4)分别构建了AaFT 基因的植物表达载体p3301-AaFT1、瞬时表达载体35S-AaFT1-eGFP、基因沉默载体pTRV2-AaFT1-GFP,并且分别转入农杆菌,为下一步红掌AaFT1基因功能研究奠定基础。(5)采用RT-PCR和RACE技术结合的策略克隆了红掌PFT1/MED25基因(AaPFT1)全长 2457 bp 的 cDNA 序列(NCBI acc.KU375464),推测其包含 1 个 1974 bp的完整开放阅读框(ORF),编码658个氨基酸。定量RT-PCR分析表明:AaPFT1在红掌’热情’各组织中都有表达,其中根的表达量较高;苗期表达量高于成年期;在叶和花的不同发育阶段,AaPFT1在幼嫩组织和成熟组织中表达量较高。AaPFT1在一年的生长周期内,AaPFT1在叶片10月份表达量最高,AaPFT1在佛焰苞10、1月份表达量较高,AalPFT1在肉穗花序5月份表达量最高。红掌’卫城,的外源激素处理表明:AaPFT1能被SA诱导迅速上调,MeJA和ET激素诱导急剧下调,而GA和ABA处理早期无显著变化。综上所述,本研究对红掌AaFT1和AaPFT1结构和表达规律的分析,为深入解析其在红掌成花诱导、器官发育、胁迫响应等过程中的作用机理奠定了基础。