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目的：本课题以酒精性肝纤维化大鼠模型为研究对象，观察调肝理脾方对TGF-β1/Smads信号通路相关细胞因子的影响，探讨其对酒精性肝纤维化大鼠的防治作用。
方法：采用乙醇精灌胃法建立大鼠酒精性肝纤维化模型，将112只SD大鼠适应性喂养3天，随机分为7组。分别设为空白对照组（Con,10只），模型组（AHF,17只），调肝理脾方低（L,17只）、中(M,17只)、高（H,17只）剂量组、调肝理脾方预防组（P,17只）以及复方鳖甲软肝片组(F,17只)。除Con组以外，均以56°白酒灌胃，按照浓度梯度稀释40%、45%、50%、56%灌胃，其中酒精的浓度每4周递增1次，灌胃体积适应性递增0.5～1ml/100g：第1～4周以40%酒精4g/kg·d灌胃，第5～8周给予45%酒精4.5g/kg·d，第9～12周给予50%酒精5g/kg·d，第13～18周给予56%酒精5.6g/kg·d，Con组以等体积生理盐水灌胃，同时P组以给药剂量为2g/kg的调肝理脾方浓缩颗粒溶液灌胃直到实验结束。酒精灌胃造模18周末，调肝理脾方给药剂量分别为L组（0.5g/kg）、M组（1g/kg)、H组（2g/kg）、F组（0.54g/kg)，连续灌胃给药治疗4周（1次/天），AHF组大鼠以等体积生理盐水灌胃。第22周末处死大鼠，观察肝部组织形态，HE染色及Masson三色胶原染色后，显微镜下观察肝脏病理变化；ELISA法检测各组大鼠血清中ALT、AST、HA、CIV、LN的含量，以及肝组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1、IL-10的含量；RT-PCR法检测TGF-β1、Smad2、3、7基因表达水平。
结果：（1）大鼠一般指标的变化：与Con组比较，AHF组体重明显降低（P＜0.05），肝脾指数升高（P＜0.05,P＜0.01）。给药后，与AHF组相比较，M组和H组以及P组大鼠体重有明显增加（P＜0.05），肝脾指数降低（P＜0.05,P＜0.01），但L组差异无统计学意义（P＞0.05）。肉眼观察肝脏质地、颜色，形态，M组、H组、P组以及F组外观接近正常。
（2）病理变化：HE染色，AHF组可见炎症细胞浸润，肝小叶点、灶状坏死，纤维结缔组织增生，调肝理脾方给药干预后，可见炎症细胞浸润的程度以及纤维结缔组织的增生明显减轻；透射电镜观察，与Con组比较，AHF组肝细胞内细胞器和线粒体数量减少，粗面内质网明显扩大，部分肌成纤维细胞处于有丝分裂期或已转化为梭形，细胞外胶原纤维增多。调肝理脾方干预后，细胞内空泡不同程度地减少，肝星状细胞（hepaic stellate cells,HSCs）内脂滴减少，未见明显增生活跃，少量胶原纤维增生；Masson染色结果，AHF组肝组织纤维显著增加，门脉区周围有大量蓝色胶原纤维，纤维间隔增多增宽，肝小叶结构损坏，调肝理脾方处理组胶原纤维间隔变细、减少，胶原生成显著减少，肝小叶结构轻度破坏，肝细胞变性程度积分降低；
（3）与Con组相比较，AHF组大鼠血清中AST、ALT、HA、LN、CIV的含量明显升高（P＜0.01）；与AHF组相比，调肝理脾方干预治疗后，可不同程度降低AST、ALT、HA、LN、CIV的含量（P＜0.05,P＜0.01）。
（4）与Con组相比较，AHF组大鼠肝组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1含量明显升高（P＜0.01），IL-10的含量显著降低（P＜0.05），与AHF组相比，调肝理脾方调肝理脾方干预治疗后，能够显著降低TGF-β1、TNF-α、IL-1的含量（P＜0.05,P＜0.01），明显增加IL-10的含量（P＜0.05）。
（5）与Con组相比，AHF组大鼠肝脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA的表达明显增加（P＜0.01），Smad7mRNA的表达水平明显降低（P＜0.01）；与AHF组相比，调肝理脾方调肝理脾方干预治疗后，TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA的表达明显减少（P＜0.01），Smad7mRNA的表达明显升高（P＜0.05,P＜0.01），其中调肝理脾方高剂量组和预防组效果最好。
结论：1.给予SD大鼠不同浓度酒精灌胃18周，可成功建立AHF模型。
2.AHF组大鼠的体重、肝脾指数、HE染色、透射电镜、Masson染色以及肝功能和肝纤维指标的结果变化，显示调肝理脾方可明显改善大鼠肝损伤和肝纤维化程度。
3.调肝理脾方可减少AHF组大鼠肝组织中IL-1、TNF-α、TGF-β1的含量，增加IL-10的含量，从而减少ECM的产生以及对下游TGF-β1/Smads通路的作用。故调肝理脾方减轻酒精诱导的大鼠纤维化的作用机制，可能与抑制IL-1、TNF-α、TNF-α、TGF-β1的表达有关。
4.调肝理脾方可抑制TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA的表达，上调Smad7mRNA的表达水平，其对酒精性肝纤维化大鼠的治疗和预防作用，可能是通过影响TGF-β1/Smads信号通路相关细胞因子表达这一途径实现的。
方法：采用乙醇精灌胃法建立大鼠酒精性肝纤维化模型，将112只SD大鼠适应性喂养3天，随机分为7组。分别设为空白对照组（Con,10只），模型组（AHF,17只），调肝理脾方低（L,17只）、中(M,17只)、高（H,17只）剂量组、调肝理脾方预防组（P,17只）以及复方鳖甲软肝片组(F,17只)。除Con组以外，均以56°白酒灌胃，按照浓度梯度稀释40%、45%、50%、56%灌胃，其中酒精的浓度每4周递增1次，灌胃体积适应性递增0.5～1ml/100g：第1～4周以40%酒精4g/kg·d灌胃，第5～8周给予45%酒精4.5g/kg·d，第9～12周给予50%酒精5g/kg·d，第13～18周给予56%酒精5.6g/kg·d，Con组以等体积生理盐水灌胃，同时P组以给药剂量为2g/kg的调肝理脾方浓缩颗粒溶液灌胃直到实验结束。酒精灌胃造模18周末，调肝理脾方给药剂量分别为L组（0.5g/kg）、M组（1g/kg)、H组（2g/kg）、F组（0.54g/kg)，连续灌胃给药治疗4周（1次/天），AHF组大鼠以等体积生理盐水灌胃。第22周末处死大鼠，观察肝部组织形态，HE染色及Masson三色胶原染色后，显微镜下观察肝脏病理变化；ELISA法检测各组大鼠血清中ALT、AST、HA、CIV、LN的含量，以及肝组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1、IL-10的含量；RT-PCR法检测TGF-β1、Smad2、3、7基因表达水平。
结果：（1）大鼠一般指标的变化：与Con组比较，AHF组体重明显降低（P＜0.05），肝脾指数升高（P＜0.05,P＜0.01）。给药后，与AHF组相比较，M组和H组以及P组大鼠体重有明显增加（P＜0.05），肝脾指数降低（P＜0.05,P＜0.01），但L组差异无统计学意义（P＞0.05）。肉眼观察肝脏质地、颜色，形态，M组、H组、P组以及F组外观接近正常。
（2）病理变化：HE染色，AHF组可见炎症细胞浸润，肝小叶点、灶状坏死，纤维结缔组织增生，调肝理脾方给药干预后，可见炎症细胞浸润的程度以及纤维结缔组织的增生明显减轻；透射电镜观察，与Con组比较，AHF组肝细胞内细胞器和线粒体数量减少，粗面内质网明显扩大，部分肌成纤维细胞处于有丝分裂期或已转化为梭形，细胞外胶原纤维增多。调肝理脾方干预后，细胞内空泡不同程度地减少，肝星状细胞（hepaic stellate cells,HSCs）内脂滴减少，未见明显增生活跃，少量胶原纤维增生；Masson染色结果，AHF组肝组织纤维显著增加，门脉区周围有大量蓝色胶原纤维，纤维间隔增多增宽，肝小叶结构损坏，调肝理脾方处理组胶原纤维间隔变细、减少，胶原生成显著减少，肝小叶结构轻度破坏，肝细胞变性程度积分降低；
（3）与Con组相比较，AHF组大鼠血清中AST、ALT、HA、LN、CIV的含量明显升高（P＜0.01）；与AHF组相比，调肝理脾方干预治疗后，可不同程度降低AST、ALT、HA、LN、CIV的含量（P＜0.05,P＜0.01）。
（4）与Con组相比较，AHF组大鼠肝组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1含量明显升高（P＜0.01），IL-10的含量显著降低（P＜0.05），与AHF组相比，调肝理脾方调肝理脾方干预治疗后，能够显著降低TGF-β1、TNF-α、IL-1的含量（P＜0.05,P＜0.01），明显增加IL-10的含量（P＜0.05）。
（5）与Con组相比，AHF组大鼠肝脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA的表达明显增加（P＜0.01），Smad7mRNA的表达水平明显降低（P＜0.01）；与AHF组相比，调肝理脾方调肝理脾方干预治疗后，TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA的表达明显减少（P＜0.01），Smad7mRNA的表达明显升高（P＜0.05,P＜0.01），其中调肝理脾方高剂量组和预防组效果最好。
结论：1.给予SD大鼠不同浓度酒精灌胃18周，可成功建立AHF模型。
2.AHF组大鼠的体重、肝脾指数、HE染色、透射电镜、Masson染色以及肝功能和肝纤维指标的结果变化，显示调肝理脾方可明显改善大鼠肝损伤和肝纤维化程度。
3.调肝理脾方可减少AHF组大鼠肝组织中IL-1、TNF-α、TGF-β1的含量，增加IL-10的含量，从而减少ECM的产生以及对下游TGF-β1/Smads通路的作用。故调肝理脾方减轻酒精诱导的大鼠纤维化的作用机制，可能与抑制IL-1、TNF-α、TNF-α、TGF-β1的表达有关。
4.调肝理脾方可抑制TGF-β1、Smad2、Smad3mRNA的表达，上调Smad7mRNA的表达水平，其对酒精性肝纤维化大鼠的治疗和预防作用，可能是通过影响TGF-β1/Smads信号通路相关细胞因子表达这一途径实现的。