【摘 要】
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随着益生菌产品近年来逐步被公众所认可,市场对于益生菌的需求日益增加,有关益生菌的研究也在不断深入且广泛。目前,市场上所使用的益生菌多来源于国外,因此,本研究从湖南的山区牧场鲜牛乳中分离乳酸菌,根据益生菌的特性进行初筛及鉴定,之后采用体外实验筛选具有高黏附性的菌株,并确定其生物学分类;最后通过细胞实验,评价高黏附性益生菌株对细胞的免疫调节作用;具体研究内容和研究结果如下:(1)对采自湖南邵阳南山牧场
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随着益生菌产品近年来逐步被公众所认可,市场对于益生菌的需求日益增加,有关益生菌的研究也在不断深入且广泛。目前,市场上所使用的益生菌多来源于国外,因此,本研究从湖南的山区牧场鲜牛乳中分离乳酸菌,根据益生菌的特性进行初筛及鉴定,之后采用体外实验筛选具有高黏附性的菌株,并确定其生物学分类;最后通过细胞实验,评价高黏附性益生菌株对细胞的免疫调节作用;具体研究内容和研究结果如下:(1)对采自湖南邵阳南山牧场、望城新希望乳业和宁乡优氏乳业牧场的鲜奶样品中乳酸菌进行分离纯化,共分离得131株乳酸菌。(2)对分离纯化的菌株进行耐酸和耐胆盐生长的初筛,再进一步通过模拟胃肠液试验、抑菌试验、蛋白水解酶活性试验进行逐步筛选,留下具备潜在益生特性的菌株,对其进行包括溶血性及抗生素敏感性的体外安全性检验。131株乳酸菌中,以耐酸和耐胆盐生长情况进行初筛留得31株,通过模拟胃肠液试验、抑菌试验、蛋白水解酶活性试验进行复筛,确定12株乳酸菌具备在人体胃肠道中的存活能力及潜在的益生特性,其体外安全性检验结果显示无溶血性且对大部分抗生素敏感。(3)在具有潜在益生特性菌株的基础上,对其进行高黏附性质的研究,通过疏水性试验和聚集试验对菌株进行筛选,再以益生菌对Caco-2细胞的黏附能力评价菌株的黏附特性,选取黏附能力较为良好的益生菌进行抑制大肠杆菌黏附Caco-2细胞的试验。研究结果显示LZ1805、LZ1817、LZ1827、LZ1932、LZ1940和LZ1949具有良好的黏附Caco-2细胞能力。其中LZ1827和LZ1949在与大肠杆菌的竞争、置换、排斥三方面试验中均表现优异。(4)将在抑制大肠杆菌黏附Caco-2细胞方面效果突出的两株益生菌进行DNA提取并测序,确定LZ1827为植物乳杆菌,LZ1949为副干酪乳杆菌。(5)确定菌种的益生菌将进行细胞水平的免疫调节研究,包括菌株与Caco-2细胞共培养、菌株对LPS刺激的炎症Caco-2细胞进行处理及菌株对收到大肠杆菌侵袭的Caco-2细胞进行处理时,检测Caco-2细胞炎症细胞因子(TNF-α、IL-4、IL-8和IL-10)表达量的变化。受试的两株益生菌在不同处理条件下,基本可以上调抗炎性细胞因子的表达水平,同时对促炎性细胞因子有下调作用,暗示着两株益生菌,在抵抗病原感染、抑制肿瘤细胞生长以及缓解炎症反应等方面具有一定的潜力,同时两株益生菌对受到大肠杆菌侵袭的肠道免疫具有积极影响。
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