Tat转运系统是大肠杆菌中重要的蛋白质转运系统.自Tat转运系统发现以来,人们采用天然的以Tat转运系统转运的酶作为报告蛋白,通过酶的分布,对信号肽的特征、转运酶的组成以及各组成的特性等进行了广泛的研究,从而对Tat转运系统有了一定的认识.但是,受研究方法和技术手段的限制,至今还难以了解转运的具体过程,不能建立合理的转运模型.本文针对Tat转运系统研究中存在问题,结合国内外最新研究成果和技术,通过理论分析和实验验证,创新的建立了一套简便直观的Tat转运系统研究方法,弥补了酶学方法受环境因素影响大,操作烦琐等不足.同时,首次建立了筛选Tat转运系统受阻菌株的筛选模型,用以寻找未发现的Tat转运系统相关基因,为建立完整的转运模型提供了有效、实用的方法.利用所建立的荧光蛋白作为报告蛋白的研究方法,不仅有利于对信号肽上的精氨酸的作用进行深入研究,还可以进一步研究转运底物的折叠性.研究与实验表明,信号肽保守序列中的双精氨酸是保证绿色荧光蛋白转运及转运效率所必需的,第二个精氨酸比第一个精氨酸更为重要,进而揭示了Tat信号肽需要一定的高级结构才能行使其功能,它不仅引导蛋白质的转运,而且也参与蛋白质的折叠,而底物氢化酶大亚基的改变将影响到氢化酶的成熟和折叠性.利用低能离子注入技术,以荧光蛋白和细菌素为报告蛋白,建立筛选Tat转运系统受阻菌株的筛选方法,具有简洁、快速、选择性强等突出优点,获得的突变株具有一系列与tat基因缺失菌株相同的性状.上述研究方法与技术,为Tat转运系统的深入研究开辟了新的途径,为建立完整的转运模型奠定了基础.