黑芥子酶—硫代葡萄糖苷系统是十字花科植物(包括拟南芥和芸苔属植物)防御植食性昆虫和病原菌侵害的主要化学防御系统,也被称作“芥子油炸弹”。对于可利用的抗虫种质资源相对较少的菜心(Brassica parachinensis Bailey)来说,如何充分利用这个有效的防御系统是解决菜心抗虫育种的关键。充分了解该防御系统的作用机理,有助于应用这个防御系统开展抗虫育种工作。本研究利用RT-PCR技术从四九菜心总RNA中扩增出890bp的黑芥子酶基因片段MY,并把它们正反插入到载体pJM007的内含子两侧,形成一个MY(RNAi)元件,经PstⅠ酶切并克隆到植物表达载体pCAMBIA1301,形成pCAMBIA1301+MY(RYAi)载体。经酶切及序列测定证实,成功地构建了黑芥子酶基因反向重复结构的RNAi植物表达载体。通过冻融法把pCAMBIA1301+MY(RNAi)载体转移到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101中。利用带有pCAMBIA1301+MY(RNAi)载体的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101,侵染四九菜心无菌苗的子叶—子叶柄,经过潮霉素筛选获得转基因植株。经过PCR检测和Southern杂交验证,获得4个转基因再生株系。提取转基因植株和正常植株的总RNA,经Northern杂交验证,转基因植株中黑芥子酶基因的表达被有效地抑制。同时,我们还研究了诱导培养基中12种不同量组合的6-BA和NAA对菜心离体植株再生频率的影响,并探讨了适宜四九菜心转化的潮霉素筛选浓度。最终,初步建立了一套适合四九菜心遗传转化的体系。