胸腺肽是胸腺分泌的具有生物活性的一类多肽混合物，是一种免疫增强剂。胸腺肽β₄（thymosinβ₄）是胸腺肽的一种，广泛存在于各类动物器官中。研究发现胸腺肽β₄具有消炎和促进创伤愈合的功效，能够促进创伤部位的血管生成、胶原沉积，可促进眼角膜的复合及头发的再生，具有很高的医用价值。本文主要研究了胸腺肽β₄分离纯化的工艺，主要工作包括：离子交换介质的筛选、胸腺肽β₄离子交换色谱纯化工艺的建立和离子交换色谱过程的优化。利用静态吸附的方法，从10种离子交换介质中筛选出CM-Sepharose FF阳离子交换凝胶和DEAE-Sepharose FF阴离子交换凝胶作为分离过程的离子交换介质。胸腺肽β₄分离纯化工艺主要包括：1)胸腺素5的提取：采用硫酸铵沉淀法，从小牛胸腺中用25％～50％的硫酸铵饱和度沉淀得到胸腺素5；2)离子交换色谱分离：首先采用CM-Sepharose FF对胸腺素5进行分离，溶液中的目标产物吸附在离子交换柱上之后，分别通过1％、4％、5％的NaCl盐溶液阶跃洗脱，检测发现目标产物存在于4％的洗脱峰中。其次，收集的洗脱峰吸附于DEAE-Sepharose FF上，分别通过水洗、1％、4％、5％的NaCl盐溶液阶跃洗脱，最终获得纯度为85.2％的胸腺肽β₄产品。分离过程的优化主要包括三部分：通过比较发现高氯酸沉淀法更利于胸腺素5的提取；对阴阳离子柱的操作条件进行了优化，优化后CM-Sepharose FF柱的优化条件为柱长30cm，洗脱流速40cm／h，DEAE-Sepharose FF柱的优化条件为进样浓度4g／L、流速60cm／h、柱长40cm；对脱盐过程进行了优化，采用凝胶过滤脱盐要比透析效率更高。采用优化后的分离条件进行分离，所得胸腺肽β₄产品纯度为90.8％。对分离得到的胸腺肽β₄产品进行检测。采用非变性凝胶电泳对胸腺肽β₄产品的活性进行了检测，检测结果表明产品具有活性。采用质谱检测了产品的氨基酸序列，所得结果与文献中一致，证明分离得到产品为胸腺肽β₄。