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动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是世界上三大致死性疾病之一。随着人们生活水平不断提升,饮食中的脂类成分所占比重也在逐渐提高,这也是导致近些年AS发病率呈现明显上升趋势的主要原因。因此,关于AS的相关研究越来越受到人们的广泛关注。他汀类药物的出现对于AS的治疗具有里程碑的意义,但是长期应用会产生明显的耐药性和副作用。为了寻找更有效、更安全的治疗方法,人们开始探索AS的具体发病机制,希望可以从中找到治疗动脉粥样硬化的新靶点。近些年研究发现,低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)的堆积是诱发AS发生的起始因素。但是,AS的进一步发展和恶化依靠巨噬细胞吞噬氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotei,Ox-LDL)后诱发的炎症反应。因此,抗炎治疗成为治疗AS的新方法。人们发现高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)可以通过转移胆固醇和抑制炎症发生两条主要途径对AS产生治疗作用。随着研究的不断深入,HDL对不同炎症细胞的作用机制逐渐被阐明。但是,HDL对巨噬细胞的作用尚不明确。因此,本课题将通过胆酸钠法合成的重组人高密度脂蛋白(Recombinant human high density lipoprotein,rhHDL),以不同的浓度与High Ox-LDL诱导巨噬细胞RAW264.转化为泡沫细胞的模型进行共孵育,探索rhHDL在巨噬细胞氧化应激过程中的调控作用和具体机制。首先对胆酸钠法合成的rhHDL通过透射电镜进行形态学鉴定,发现合成的rhHDL在透射电子显微镜下是较为均匀圆整,粒径在150nm～200nm的圆形颗粒。巨噬细胞RAW264.7与80mg/LHigh OxLDL共孵育24h构建泡沫细胞模型,分析鉴定构建的泡沫细胞中胆固醇含量明显增加,细胞内胆固醇酯(CE)与总胆固醇(TC)比值>50%,且与对照组比较有显著性差异。形态学观察显示模型细胞内有大量脂滴的存在,符合泡沫细胞的形态特征。对两者进行鉴定完成后,将不同浓度rhHDL(25mg/L、50mg/L、100mg/L)与泡沫细胞模型共孵育24h,发现随着rhHDL浓度的升高,可以降低泡沫细胞内CE/TC的比值和脂质的含量,对巨噬细胞的泡沫化产生显著的抑制作用。rhHDL的时效曲线显示rhHDL可以介导细胞内胆固醇外流,且作用效果随着作用时间延长而增强。凋亡实验显示:High OxLDL在诱导泡沫细胞形成过程中会伴有明显细胞凋亡现象,rhHDL的加入会显著地抑制巨噬细胞的凋亡。通过进一步实验发现,rhHDL是通过促进巨噬细胞内抗凋亡基因的表达和抑制促凋亡基因的表达发挥其抑制巨噬细胞凋亡的功能。氧化应激实验显示:rhHDL能够有效的提高巨噬细胞内超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)的含量,促使巨噬细胞内活性氧含量的降低。同时,巨噬细胞中脂质氧化产物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量也得到了明显的降低。说明rhHDL能够有效的提高巨噬细胞的抗氧化能力。进一步的机制探索发现,经过rhHDL的作用巨噬细胞内Nrf2的表达量显著的提高,Nrf2作为Keapl-Nrf2-ARE通路中关键的成员,其高表达促进下游抗氧化基因的表达,进而增强巨噬细胞的抗氧化应激的能力。综上所述,发现rhHDL通过促进巨噬细胞内胆固醇外流抑制其泡沫化进程、抑制巨噬细胞的凋亡和提高巨噬细胞抗氧化能力等方面发挥治疗作用的。并且,初步的阐述了 rhHDL是通过调节Keapl-Nrf2-ARE中的Nrf2表达提高巨噬细胞的抗氧化能力。