使用MALDI-MSI技术研究小鼠卵巢中脂质的分布

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卵母细胞的发育对环境的变化特别敏感,平衡的代谢对于卵母细胞的成熟至关重要。在初级卵泡向成熟卵泡的发育和成熟卵母细胞的排出的这个过程中伴随着能量变化。脂质代谢是能量的重要来源。基质辅助激光解吸/电离质谱成像(MALDI-MSI)是一种直接在组织切片中实现分子物种无标记映射的技术,目前应用于多种学科以研究各种小分子及大分子如蛋白质、脂质、糖类等的功能,以达到更加了解这些分子的代谢过程的目的,在临床、生物、药物等领域已有所应用。目的使用MALDI-MSI技术来获得小鼠卵巢中m/z100—900范围内脂质的表达谱,分析小鼠卵巢中卵母细胞的脂质分布,以期对小鼠卵母细胞的发育与脂质的分布关系有一个更加直观的了解。材料与方法1.从小鼠体内取出卵巢制成10μm的冰冻组织切片,在组织表面均匀喷涂2,5-二羟基苯甲酸(DHB)后使用MALDI-FT-ICR质谱仪进行电离,收集电离后的分子获取卵巢表面脂质的表达谱;2.使用H&E染色的切片在显微镜下分析卵巢结构,与质谱图像对比分析出卵巢上脂质的分布差异;3.使用SCILS Lab软件对获取的质谱数据进行聚类分析、组成分分析、接收者操作特征曲线分析及箱式图分析来分析卵巢上脂质的差异。结果1.研究发现在小鼠卵巢上丰度较高的脂质主要是甘油磷脂,包括有磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油磷酸(PGP);2.一些脂质如m/z 770.5639(PE 38:3)和m/z 797.5407(PG 38:5)m/z 798.5908(PE 40:3)在小鼠卵母细胞处的丰度强于颗粒细胞,脂质m/z 767.4835(PG 36:6)在颗粒细胞处信号强于卵母细胞;3.脂质m/z 761.4364(PGP 29:0)、m/z 789.5151(PGP 31:0)在小鼠初级卵泡的卵母细胞内含量丰富而在成熟卵泡的卵母细胞含量显著性下降,甚至在颗粒细胞中也无法检到。结论1.研究发现小鼠卵巢上分布着各种脂质,它们在小鼠卵巢上的分布不同,含量也不同,在小鼠卵巢上进行着丰富的脂质代谢以维持卵母细胞的成熟;2.在小鼠卵母细胞和颗粒细胞发现脂质分布及含量存在显著性差异;3.在不同发育阶段的卵母细胞发现不同脂质的分布及含量存在差异。
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